CIRCLE-seq和CHANGE-seq與SITE-seq同期發表的CIRCLE-seq一定程度上解決了SITE-seq的一些問題。CIRCLE-seq的第一步是將純化后的基因組DNA隨機打斷成300bp左右的片段，然后首尾相連成環狀DNA，這種方法很好地避免了DNA隨機斷裂造成的背景噪聲。實驗的第二步是用Cas9切割環狀DNA，再連上接頭并進行雙端測序，這樣就可以在一次測序中同時獲取切割位點的兩側序列，彌補了SITE-seq的另一個缺點。CIRCLE-seq從總體上來說要優于SITE-seq，但是將基因組DNA隨機打斷后成環的效率并不高，所以同一作者在3年后發表了CHANGE-seq，用Tn5一步法打斷基因組并加接頭，提高了成環效率，降低了起始基因組DNA的用量。如何降低脫靶效應？選擇特異的gRNA； 使用RNP； 使用eSpCas9的質粒； 使用Nickase Cas9。常州crispr脫靶檢測安評

R-loop seq雖然不是一種真正意義上的脫靶位點檢測方法，但能為堿基編輯脫氨酶的脫靶提供一種度量方法，以便于之后的脫氨酶點突變優化，來降低脫靶的發生幾率。2) Detect-seqCRISPR衍生技術由于其復雜性，檢測其脫靶位點的hexin思路是捕獲實驗過程中的關鍵中間產物或者終產物。這種設計思路下，目前較為成功的是檢測堿基編輯CBE脫靶位點的Detect-seq[13]。CBE的原理是將dC脫氨變為dU，迫使其對側的dG變為dA，較終將堿基對從C-G轉變為T-A。Detect-seq便是針對中間態的dU，使用Uracil DNA Glycosylase (UDG)，去除U堿基后，替換為帶Biotin的U堿基，捕獲堿基編輯的脫靶位點，并且sgRNA依賴和sgRNA不依賴的脫靶位點都能找到。該方法類似檢測DNA甲基化的重亞硫酸鹽測序法，通過處理特定的堿基，可以捕獲全基因組上的CBE脫靶位點。南通育種脫靶檢測方法基因編輯可以‘指哪打哪’,四種脫靶檢測方法。

圍繞大家關心的CRISPR基因編輯安全性問題，我們首先對CRISPR脫靶位點檢測技術進行一次大盤點，在sgRNA設計階段需要如何做才能夠盡可能地避免脫靶現象的發生。較簡單的脫靶位點檢測方法是全基因組測序（WGS），但在實際使用中，即使測序深度達到100X，也很難發現一些低頻率的脫靶位點，同時測序成本卻非常高。為彌補WGS的這些缺陷，常見的脫靶位點檢測技術都需要對脫靶位點進行捕獲富集，來提高檢測靈敏度，降低測序成本。按照實驗原理的不同，脫靶位點檢測技術可以分為細胞外、細胞內和其他特殊方法這3類。

脫落與傳播。對于部分有ganran或復制能力的基因zhiliao產品，從受試者者體內排出或脫落到自然環境后，可能會傳播給受試者的密切接觸者，包括患者親屬和醫護人員等，進而產生病毒傳播或ganran風險。其他考慮因素。除產品相關因素外，基因zhiliao產品的長期風險評估還應考慮靶細胞/組織/qiguan，患者群體（年齡、免疫狀態、死亡風險等）和相關疾病的特征以及合并其他zhiliao的影響。如果基因zhiliao產品可在生殖腺、生殖細胞等組織qiguan中分布并發揮作用，可能對受試者或其配偶的生育能力、妊娠以及胎兒產生難以預測的遲發性影響。根據選擇的sgRNA，通過生物信息學方法，對sgRNA進行脫靶分析。

檢測方法的敏感度、特異性和可重復性應經過驗證，并設計適當的陽性和陰性對照；當體內靶細胞或替代細胞中載體序列陽性的比例超出預期范圍時，應開展克隆性生長的評估。如果存在優勢克隆或單克隆生長，應在不超過3個月的時間內再次檢測確認，并盡快開展整合位點的分析。當載體的整合位點確定后，應與人類基因組數據庫及基因組的其他數據庫等進行比較，確定整合位點的基因功能，評估是否與包括zheng在內的任何疾病有關。如果受試者體內出現載體陽性細胞的克隆性生長，或檢測發現基因整合位點在基因或相關基因附近，應縮短檢測間隔至不超過3個月并密切監測惡性liu征兆，直至檢測不到基因zhiliao載體。crispr脫靶檢測，推薦唯可生物，實驗實力強，專業性高，檢測效率高，結果準確率高。南通育種脫靶檢測方法

值得收藏的CRISPR脫靶檢測方法。常州crispr脫靶檢測安評

如何檢測脫靶效應？在gRNA修飾中，截短的sgRNA是一種減少脫靶效應的簡單方法，并且基于RNP的遞送在大多數情況下適用于獲得更高的目標活性。此外，選擇合適的Cas變體對于減少脫靶效應也至關重要。但選擇合適的脫靶檢測工具，也是重中之重。脫靶預測結合PCR檢測法，利用脫靶預測軟件預測潛在的脫靶位點，PCR擴增預測的脫靶位點，利用直接測序或酶切法檢測脫靶情況。操作簡便、成本低偏倚性預測。全基因組測序，一種通過高通量測序檢測脫靶突變的方法，需要選擇適當的參考基因組過濾背景突變，數據比對分析獲得含有PAM基序的潛在修飾位點，進一步基因擴增驗證其突變情況。高通量全基因組范圍檢測可檢測SNPs，Indels和染色體水平變化。常州crispr脫靶檢測安評