1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵。活細胞分泌到胞外的囊泡樣小體，含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA)。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、抽血技巧。操作要輕柔迅速。試管可翻轉(zhuǎn)8-10次使樣本與抗凝劑混勻，避免劇烈搖晃。混勻后，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準(zhǔn)確時間，因為抽血與離心之間的時間間隔可能是一個影響因素。外泌體在抽血后30分鐘內(nèi)是比較穩(wěn)定的，若時間過長將導(dǎo)致外泌體數(shù)量增加。血小板極易因抽血時的物理因素而并釋放出外泌體，其中包括接觸、壓力、切力。2、抽血時間。除了血液黏度，體內(nèi)血液的各項指標(biāo)在1天中變化很大。生理節(jié)律會對血小板的產(chǎn)生很大的影響。白細胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細胞和細胞會隨時間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會隨時間變化。目前尚無設(shè)計較好的實驗對證實不同時間血液中外泌體的變化，故應(yīng)在相同的時間采集樣本。目前飲食是否會對EV產(chǎn)生影響尚未可知，但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型、數(shù)量和作用，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時間進行。北京外泌體提取試劑廠家批發(fā)價獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時。

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等，然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣，費事費力，而且步驟多導(dǎo)致實驗中容易污染，且損耗量大，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對于抽提細胞上清來說，更是極為不請便，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀，都具有操作極其不便的缺點，總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔，造成濃縮效率低，濃縮管重復(fù)利用差，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團，造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差，對于后續(xù)實驗也有影響

2018版《指導(dǎo)要求》說明外泌體沒有限定單一的分離手段，多種手段都可以進行細胞外囊泡的富集。《指導(dǎo)要求》編寫者們認(rèn)為“高回收率，低特異性”的富集手段是指那些富集囊泡的同時會有大量的非囊泡組分被富集，甚至細胞的整個分泌組都會被摻入其中，歸入這一類的分離手段主要包括通過改變電荷或通過高聚物作用的沉淀試劑盒、低分子量截流的超濾分離、超長時間和超高離心力的超速離心等。Wako的MagCapture?ExosomeIsolationKitPS（產(chǎn)品編號299-77603（2tests），293-77601（10tests）），使用PS親和法對外泌體進行提取，損失小且能獲得高純度的外泌體。外泌體的提取分離：超速離心法（差速離心）。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。五是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化。濟南正規(guī)外泌體提取試劑哪家好

由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

研究探討了外泌體是否可以作為RNAi的有效載體的可能性。與脂質(zhì)體和其他合成藥物納米顆粒載體不同，外泌體含有可能增強內(nèi)吞作用的跨膜和膜錨定蛋白，從而促進其內(nèi)容物的遞送。CD47是外泌體蛋白質(zhì)之一，是一個普遍表達的整合素相關(guān)跨膜蛋白，其部分功能可以保護細胞免受吞噬作用。CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα，也稱為CD172a）的配體，CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖，增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用，但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn)，CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理，并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以，外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

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