PCR常使用目標序列的拷貝數或某一給定樣品中轉基因的百分比來體現方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實驗過程所用試劑的兼容性較好,在使用dPCR進行轉基因檢測時,通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術對相同樣品檢測時,兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765個微單元)芯片數字PCR分析儀測定標準物質ERM-AD413檢測轉基因玉米MON810。該小組應用dPCR技術評估在qPCR定義下的靈敏度數值,在拷貝數200-700之間,dPCR與qPCR的測量結果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比,dPCR在低于拷貝數200時有被低估的風險,在高于拷貝數1000時有被高估的風險。dPCR在同一陣列上同時測量轉基因和內源性靶點時,需要稀釋內源性靶點和轉基因靶點在合理拷貝數范圍內以保證dPCR測量結果的準確性。數字PCR的兩大應用場景在于基因檢測、無創出生缺陷篩查。廣州數字PCR市場前景
數字PCR技術流分類目前,dPCR的基本方法都已經建立,根據反應單元的不同形式,主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統。微液滴制備的方法,目前主流的有四種:1)芯片微孔物理分割法,俗稱物理分隔法,公司有Fluidgm,Qiagen,Roche,ThermoFisher,;2)液滴分割法,俗稱油包水,代替公司有Bio-Rad;3)雜交式芯片液滴法,公司有Stilla;4)注射振動制滴法。PS:芯片式物理分割技術所有已經過期,目前有不少公司在這個技術的基礎上進行開發,例如羅氏。蘇州一體化數字PCR分析應用dPCR的結果統計方式有2種,一種是采用標記多種顏色,另一種采用概率統計的數據處理方法。
由于現有的商業化數字PCR設備在物理上只設置了2個檢測通道,所以存在一個明顯的短板:不能同時進行多個位點的檢測。在樣品多位點的檢測中,就需要更多的起始樣品,但臨床上組織的樣品非常有限。相比之下熒光定量PCR儀上就很容易實現多重檢測。為了考察利用數字PCR實現多重檢測的可能性,英國TheInstituteofCancerResearch的研究人員以非小細胞肺相關的KRAS基因為檢測對象,在Bio-Rad的數字PCR系統上通過3個三重ddPCR檢測體系來實現9個KRAS突變位點的檢測。
在PCR進行的過程中,首先是引物和探針分別結合,然后開始擴增。如果一個微滴當中有目標基因的片段,Taqman探針就會被酶切碎,熒光基團和淬滅基團分離。在后面的檢測過程中,熒光基團被激發光路激發之后就會發熒光。如果沒有,Taqman探針就不會被切碎,在后面的檢測過程中,熒光基團吸收到激發光的能量,就會被淬滅基團給淬滅,那么儀器就檢測不到這個微滴的信號。檢測的過程中,并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點,這個反應當中就有幾個目標基因的拷貝。因為目標基因的片段,在微滴當中的分布,是符合泊松分布的(也就是說進不進的概率相等,并且相互獨立)。所以,一個發光的微滴中,可能有一個或者三個四個,甚至更多個目標基因的拷貝。因此,發光的微滴數與原始的基因拷貝數并不是一對一的對應關系。全自動數字PCR平臺,讓數字PCR真正邁入新時代,助推數字PCR普及應用。
根據泊松分布的定義和適用條件可知,如果我們設微液滴總數為N,投入的靶序列拷貝數為M,那么“每個微液滴中的靶序列拷貝數”的概率分布是近似滿足泊松分布的。理解之前,首先要明確一點,在檢測的過程中,并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點,這個反應當中就有幾個目標基因的拷貝。因為目標基因的片段,在微滴當中的分布,是符合泊松分布的(也就是說進不進的概率相等,并且相互獨立)。所以,一個發光的微滴中,可能有一個或者三個四個,甚至更多個目標基因的拷貝。因此,發光的微滴數與原始的基因拷貝數并不是一對一的對應關系。在數字PCR賽道,塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無創產前篩查注冊證的申報。珠三角賽默飛數字PCR解決方案
拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。廣州數字PCR市場前景
PCR已成為分子診斷領域重要的技術手段之一,占據分子診斷市場的半壁江山。數字PCR是一代PCR技術,也是當前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測技術。但數字PCR使用成本仍然相對較高,檢測靶點數少(一般≤6靶點/反應),阻礙了其在臨床中的大規模應用,提高數字PCR的多重檢測能力迫在眉睫。基于熒光通道數的增加和基于探針濃度梯度增加,均可以在一定程度上提高數字PCR檢測重數,然而只能達到"線性"增加的目的。基于探針濃度梯度的多重檢測技術雖然光'f明顯增加多重能力,但由于無法避免交叉反應現象,不能確保獲得位點特異性的分簇,因此穩定性不足、靈敏度較差,難以滿足臨床級別的數據要求。而基于創新的且數字PCR獨特適用的熒光編碼技術可以實現“指數”級的多重檢測,顛覆性的提高數字PCR檢測重數,覆蓋臨床應用多場景需求。廣州數字PCR市場前景
廣州雙螺旋科學儀器有限公司是一家從事數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀研發、生產、銷售及售后的服務型企業。公司坐落在廣州市黃埔區銳豐三街4號617房,成立于2015-04-17。公司通過創新型可持續發展為重心理念,以客戶滿意為重要標準。公司主要經營數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀等產品,產品質量可靠,均通過精細化學品行業檢測,嚴格按照行業標準執行。目前產品已經應用與全國30多個省、市、自治區。廣州雙螺旋科學儀器有限公司研發團隊不斷緊跟數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀行業發展趨勢,研發與改進新的產品,從而保證公司在新技術研發方面不斷提升,確保公司產品符合行業標準和要求。廣州雙螺旋科學儀器有限公司注重以人為本、團隊合作的企業文化,通過保證數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀產品質量合格,以誠信經營、用戶至上、價格合理來服務客戶。建立一切以客戶需求為前提的工作目標,真誠歡迎新老客戶前來洽談業務。