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廣州數字PCR試劑盒

來源: 發布時間:2023-01-14

基于數字PCR技術平臺,塔歌生物成功地開發了胎兒染色體非整倍體(T21,T18和T13)無創產前篩查試劑盒(數字PCR-NIPT),并已完成數百例臨床樣本驗證。數字PCR-NIPT的陽性檢出率和NGS相似,且成本接近血清學,可以在上述應急策略中取代血清學作為靈敏度和特異性更高的初篩方法,以有效提高陽性檢出率,降低需要復篩的假陽性樣本數和節省總的篩查成本。數字PCR應用前景廣闊,可用于病原微生物檢測、基因檢測、無創產前篩查、測序結果驗證等領域。但目前,大多數醫院采購的數字PCR儀器是用于科研層面,在臨床應用上仍處于起步階段,未得到普遍應用。dPCR被稱作第三代PCR技術,但dPCR技術的廣泛應用逐漸顯現出一些不足之處。廣州數字PCR試劑盒

數字PCR是一種核酸分子定量技術。當前核酸分子的定量有三種方法,光度法基于核酸分子的吸光度來定量;實時熒光定量PCR(RealTimePCR)基于Ct值,Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環數;數字PCR是的定量技術,基于單分子PCR方法來進行計數的核酸定量,是一種定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。這樣經過PCR循環之后,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。廣州數字PCR試劑盒無創產前篩查有望成為數字PCR在臨床快速落地的應用。

在PCR進行的過程中,首先是引物和探針分別結合,然后開始擴增。如果一個微滴當中有目標基因的片段,Taqman探針就會被酶切碎,熒光基團和淬滅基團分離。在后面的檢測過程中,熒光基團被激發光路激發之后就會發熒光。如果沒有,Taqman探針就不會被切碎,在后面的檢測過程中,熒光基團吸收到激發光的能量,就會被淬滅基團給淬滅,那么儀器就檢測不到這個微滴的信號。檢測的過程中,并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點,這個反應當中就有幾個目標基因的拷貝。因為目標基因的片段,在微滴當中的分布,是符合泊松分布的(也就是說進不進的概率相等,并且相互獨立)。所以,一個發光的微滴中,可能有一個或者三個四個,甚至更多個目標基因的拷貝。因此,發光的微滴數與原始的基因拷貝數并不是一對一的對應關系。

PCR已成為分子診斷領域重要的技術手段之一,占據分子診斷市場的半壁江山。數字PCR是一代PCR技術,也是當前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測技術。但數字PCR使用成本仍然相對較高,檢測靶點數少(一般≤6靶點/反應),阻礙了其在臨床中的大規模應用,提高數字PCR的多重檢測能力迫在眉睫。基于熒光通道數的增加和基于探針濃度梯度增加,均可以在一定程度上提高數字PCR檢測重數,然而只能達到"線性"增加的目的。基于探針濃度梯度的多重檢測技術雖然光'f明顯增加多重能力,但由于無法避免交叉反應現象,不能確保獲得位點特異性的分簇,因此穩定性不足、靈敏度較差,難以滿足臨床級別的數據要求。而基于創新的且數字PCR獨特適用的熒光編碼技術可以實現“指數”級的多重檢測,顛覆性的提高數字PCR檢測重數,覆蓋臨床應用多場景需求。楊雁峰博士堅信數字PCR是可以應用于無創產前篩查的理想技術之一,這也是他2016年創立塔歌生物的初衷。

數字PCR技術流分類目前,dPCR的基本方法都已經建立,根據反應單元的不同形式,主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統。微液滴制備的方法,目前主流的有四種:1)芯片微孔物理分割法,俗稱物理分隔法,公司有Fluidgm,Qiagen,Roche,ThermoFisher,;2)液滴分割法,俗稱油包水,代替公司有Bio-Rad;3)雜交式芯片液滴法,公司有Stilla;4)注射振動制滴法。PS:芯片式物理分割技術所有已經過期,目前有不少公司在這個技術的基礎上進行開發,例如羅氏。20世紀末,Bert Vogelstein等提出數字PCR的概念。德國賽默飛數字PCR熒光通道

臻準推出新款數字PCR產品:AccuONE2.0數字PCR系統。廣州數字PCR試劑盒

在定量PCR時,我們常常糾結一個問題,究竟是相對定量還是***定量呢?如今,你無需糾結了,因為數字PCR(digitalPCR)來了。盡管這兩種技術有些類似,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量,而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域:拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達)、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。廣州數字PCR試劑盒

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