dPCR的測量結果通常表示為含量,即拷貝數值或轉基因質量百分比,而QPCR結果通常表示為拷貝數的質量分數。目前市場上可購買到大多數轉基因標準物質,以qPCR定值的標準物質是以拷貝數(單倍體基因組當量)的質量分數來表示特性量;以dPCR定值的標準物質直接采用拷貝數比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式,會造成測量結果不可比。因此質量分數、拷貝數和拷貝數比例之間的關系需要轉化,才能得到單位一致,數值可比的數據。EU聯合研究中心建議使用轉換因子從拷貝數換算到質量分數。dPCR的結果統計方式有2種,一種是采用標記多種顏色,另一種采用概率統計的數據處理方法。廣東數字PCR市場前景
在熒光定量PCR應用已經如此的情況下,緣何數字PCR仍然能橫空出世?中心點在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場應用提供了非常重要的檢測工具支撐,但仍然有尚未被滿足的客戶需求。熒光定量PCR需要基于標準品制作的標準曲線進行定量,屬于相對定量,操作較為復雜,且終端用戶對其結果的重復性、靈敏性、精密度、分辨率、對PCR反應抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數字PCR通過將反應體系進行有限稀釋至成千上萬的反應單元中,實現了核酸靶標的單分子擴增。PCR擴增結束后,基于終點法對陽性液滴數和總液滴數進行計數,結合泊松分布原理,從而實現對起始樣本的定量。其極大地簡化了操作步驟,并且大幅提高了檢測性能,尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測上(靈敏性可達0.001-0.0001%),其優異的性能得到了終端用戶的認可。珠三角全自動數字PCR數字PCR主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法。
數字PCR技術流分類目前,dPCR的基本方法都已經建立,根據反應單元的不同形式,主要可分為微板式、微腔式和和微滴式三大類系統。微液滴制備的方法,目前主流的有四種:1)芯片微孔物理分割法,俗稱物理分隔法,公司有Fluidgm,Qiagen,Roche,ThermoFisher,;2)液滴分割法,俗稱油包水,代替公司有Bio-Rad;3)雜交式芯片液滴法,公司有Stilla;4)注射振動制滴法。PS:芯片式物理分割技術所有已經過期,目前有不少公司在這個技術的基礎上進行開發,例如羅氏。
數字聚合酶鏈式反應(digitalpolymerchainreaction,dPCR)技術因具有高靈敏度、受基質干擾少等優勢而被廣用于轉基因食品檢測。本研究綜述了數字PCR技術的原理、系統各部件的優劣勢,梳理了數字PCR技術在轉基因檢測與溯源技術(標準物質)方面的進展和發展趨勢,以期為轉基因食品檢測領域提供參考依據。dPCR的擴增過程大致上可以分為3步:樣品的分散、樣品的熱循環擴增和樣品的檢測。對于數字PCR儀器系統,各個部件之間仍然有較大的改進空間,要發揮部件之間的協同作用是很重要的,而且有持續研究的價值。表1中總結了部分常見的數字PCR系統的類型,以及相對在硬件、便攜性、性價比和自動化程度上的比較。在dPCR中,樣品被分區,使得樣品內單個的核酸分子被定位并被集中在許多分離的區域內。
數字PCR系統的分散方式決定了分散數量,其結果基于統計的方法進行定量,增加反應單元數量(統計樣本量),可以增加其檢測的容量和動態檢測線性范圍達到和qPCR相近的動態范圍,同時減小一個反應單元中包含多個分子所造成的誤差,達到提高靈敏度和準確度。影響dPCR定量結果的因素包括:儀器采用的分散方式與數量、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結果表達方式。分散方式與數量由數字PCR系統決定,分散體積和結果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優化得到。國產dPCR企業在上述應用領域不斷與伯樂、賽默飛、羅氏、凱杰、因美納等頭部企業展開競爭,搶占市場份額。深圳全自動數字PCR市場前景
dPCR可直接溯源SI國際單位制摩爾,適合單一、雙重及多重轉基因標準物質研究,一次可識別不同的轉基因區域。廣東數字PCR市場前景
了解泊松分布,我們先要從二項式分布說起,二項式分布是一個離散概率分布,它給出了m次試驗中k次成功的可能性,每次試驗的概率為p,例如當擲骰子時,二項分布給出了在10次試驗中恰好有7次擲出4的概率。在數字PCR的情況中,投擲骰子類似于將一個目標實體隨機“投擲”到一組分區中,當目標落在選定的分區中時,就是成功。如果有n個分區,并且分區過程是完全隨機的,則目標出現在所選分區中的概率為1/n。該試驗重復m次,樣品中的每個分子一次。如下所示的二項式分布給出了k個成功的概率,即所選分區恰好包含k個分子的概率。數字PCR通常采用大量分區。當n很大,并且嘗試成功的概率(1/n)很小時,二項分布可以近似為泊松分布。廣東數字PCR市場前景
廣州雙螺旋科學儀器有限公司是我國數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀專業化較早的有限責任公司(自然)之一,公司始建于2015-04-17,在全國各個地區建立了良好的商貿渠道和技術協作關系。公司承擔并建設完成精細化學品多項重點項目,取得了明顯的社會和經濟效益。雙螺旋科學儀器將以精良的技術、優異的產品性能和完善的售后服務,滿足國內外廣大客戶的需求。