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上海國產數字PCR生命科學用品

來源: 發布時間:2023-04-05

dPCR的結果統計方式有2種,一種是采用標記多種顏色,通過不同檢測通道分辨不同顏色和強度,再根據分散液滴的數量計算待測基因的含量;另一種采用概率統計的數據處理方法,即通過泊松分布的方法對結果進行分析。應用概率統計分析數據和對數據處理方法的模型直接關系著結果的準確性和分析時間的長短。常用的統計方法是假設每個微反應單元的體積相同,根據泊松統計計算拷貝數,公式為:M=-Vx1n(1-x/)其中M是目標總拷貝數量;V是微反應單元數量;x是發光的微反應單元數量。臻準推出新款數字PCR產品:AccuONE2.0數字PCR系統。上海國產數字PCR生命科學用品

目前全球數字PCR的市場規模約1.5億-2.5億美元,約占熒光定量PCR市場規模(約20億美元)的10%,但增長趨勢明顯,有望逐步替代熒光定量PCR技術。目前國際市場有伯樂、賽默飛、凱杰、Stilla、羅氏等主要數字PCR玩家。根據MordorIntelliaence研究報告預測,2019-2024年全球qPCR和dPCR市場將以8.8%的年復合增長率增長,從2014年的41.13億美元增長到2024年的62.7億美元。其中,dPCR的增速更快達11.9%,將從2014年的4.75億美元,增長到2024年8.34億美元,為PCR檢測帶來極大的市場。但其預測的發展趨勢仍有參考價值。德國全自動數字PCR熒光通道數字PCR的應用甚廣,除了可應用于進行突變的檢測以外,也可運用于基因擴增的檢測。

相比于qPCR,dPCR在轉基因檢測中具有以下優勢:(1)檢測靈敏度高:理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝,而實際應用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數值非常接近,所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數下得到精確的結果;通常轉基因比參考基因(內源基因)濃度低很多;(2)前處理簡單且受基質成分干擾較小:dPCR反應效率和精密度受到食品基質成分干擾影響較小,可應用于混合基質樣品中低豐度DNA的檢測;(3)dPCR對抑制劑的敏感性較低:由于dPCR結果表示為“有熒光“或“無熒光”,即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光;(4)適合多重轉基因檢測:食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉基因片段,可以進行多重dPCR檢測,提高分析效率。同時,dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾,適合單一、雙重及多重轉基因標準物質研究,一次可識別不同的轉基因區域。下面詳細進行說明。

相比于cPCR技術和第二代qPCR技術,dPCR技術具有定量,可溯源至SI國際單位制摩爾;基質成分干擾較小[51];靈敏度高;對抑制劑的敏感性較低;適合多重轉基因檢測[52.53],可提高分析效率;實驗條件優化簡單[54]對實驗條件優化的要求較低,適合多重基因檢測等優勢,可為轉基因農作物提供準確的量值保證,目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴,但隨著系統加工工藝的改進以及使用較便宜的材料,聚合成更小的體積[556],其價格將會不斷的降低,使其應用到更多的檢測中。數字PCR的兩大應用場景在于基因檢測、無創出生缺陷篩查。

面對日益嚴格的限量標準和可預期降低的儀器購置成本,數字PCR將在食品檢測領域起到越來越重要的作用:同時,數字PCR技術帶來的量值的溯源方式,也將成為轉基因標準物質的主要研究方向。發展dPCR協同分析和自動化程度,使其具有更好兼容性、更低廉的成本,可使數據結果不間斷地納入到全食品安全全產業鏈中,從而在未來的食品檢測中得到更廣的應用。dPCR多重檢測可在不使用標準曲線的情況下,在同一分析過程中同時測定單一或多個轉基因與參考基因的比率,提高檢測的效率節省重復操作。拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。華南地區醫療系統認證數字PCR價格

數字PCR技術min檢測下限可到2copies/ml,比qPCR靈敏度提升了100倍。上海國產數字PCR生命科學用品

數字PCR實驗步驟包括:1)試劑配制:將10xdPCRBuffer、dPCR酶、引物和探針、無核酸酶水混合成dPCR預混液,并分裝到8聯排管中或96孔板中;將各待測樣本的核酸模板、陽性對照、陰性對照分別加入相應的8聯排管中或96孔板中;2)芯片進樣:在小海龜BioDigital·青全自動樣品處理系統上進行芯片上反應液進樣和液滴生成;3)芯片擴增:在小海龜BioDigital·青PCR擴增儀上進行芯片上PCR擴增反應;4)芯片閱讀:在小海龜BioDigital·青生物芯片閱讀儀上進行芯片上熒光信號閱讀;5)數據分析:使用生物芯片數據分析·青軟件進行數據分析和報告導出;上海國產數字PCR生命科學用品

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