常規PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數的標準DNA制定標準曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異，從而影響定量結果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可以進行定量。如何在雙通道設置及雙探針標記的情況下實現多重檢測?不同位點的雙探針檢測體系中引物和探針采用不同的終濃度，這樣陽性微滴的終點FAM/HEX熒光信號強度就會不同，利用陽性微滴不同的“分簇(cluster)”來區分不同的突變位點。采用對應的KRAS野生型和突變型細胞系對雙重ddPCR檢測體系的性能進行驗證。結果顯示除了Q61H位點外，其他位點的檢測體系在54C的情況下均能很好的區分4個明顯的cluster。三重ddPCR檢測體系存在的問題：不同位點檢測體系之間的cross-reactivity。華南地區進口數字PCR技術

產物越短，往往擴增效率越高。模板二級結構（Templatesecondarystructure）：PCR變性中和變性后的單鏈DNA不夠穩定，容易自發折疊形成二級結構。應避免可形成穩定二級結構的模板鏈區域，因為如果模板鏈形成的二級結構在退火溫度下穩定存在，定位在模板鏈二級結構處的引物將無法同模板鏈相結合。使用mfold可預測引物待結合的區域是否存在復雜的二級結構。設計引物時，盡量使引物定位在模板二級結構以外的序列上。避免具有4個以上相同的連續堿基的區域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸階段聚合酶“滑動（PolymeraseSlippage）”。選擇GC含量（GCContent）在50-60%之間的區域。如果高GC含量區域不可避免，可以嘗試提高退火溫度，并使用添加劑，例如甘油，珠三角全自動多重數字PCR試劑盒目前dPCR中體積優化方法以光學顯微鏡觀測為主。

PCR已成為分子診斷領域重要的技術手段之一，占據分子診斷市場的半壁江山。數字PCR是一代PCR技術，也是當前靈敏度和定量精度比較高的分子檢測技術。但數字PCR使用成本仍然相對較高，檢測靶點數少（一般≤6靶點/反應），阻礙了其在臨床中的大規模應用，提高數字PCR的多重檢測能力迫在眉睫。基于熒光通道數的增加和基于探針濃度梯度增加，均可以在一定程度上提高數字PCR檢測重數，然而只能達到"線性"增加的目的。基于探針濃度梯度的多重檢測技術雖然光'f明顯增加多重能力，但由于無法避免交叉反應現象，不能確保獲得位點特異性的分簇，因此穩定性不足、靈敏度較差，難以滿足臨床級別的數據要求。而基于創新的且數字PCR獨特適用的熒光編碼技術可以實現“指數”級的多重檢測，顛覆性的提高數字PCR檢測重數，覆蓋臨床應用多場景需求。

數字PCR系統的分散方式決定了分散數量，其結果基于統計的方法進行定量，增加反應單元數量（統計樣本量），可以增加其檢測的容量和動態檢測線性范圍達到和qPCR相近的動態范圍，同時減小一個反應單元中包含多個分子所造成的誤差，達到提高靈敏度和準確度。影響dPCR定量結果的因素包括：儀器采用的分散方式與數量、溶液稀釋方法、分散體積的準確性以及結果表達方式。分散方式與數量由數字PCR系統決定，分散體積和結果表達方式需要實驗人員在實驗過程中優化得到。20世紀末，Bert Vogelstein等提出數字PCR的概念。

基于微滴的QX100dPCR儀，利用油包水技術，將樣品平均分配到20000個微滴油包水中，利用微滴分析儀對微滴進行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR儀，在高壓氣體驅動下，將每個標準反應體系分割成包含100萬至1000萬個皮升級別微滴的反應乳液。數字PCR就形成了2大派別，芯片式和微滴式。不論是哪種數字PCR，其原理都是有限稀釋，終點PCR和泊松分布。將含有核酸模板的標準PCR反應體系，平均分配成幾萬個PCR反應，分配到芯片或微滴中，使每個反應中盡可能含有一個模板分子，進行單分子模板PCR反應，通過讀取熒光信號的有或無進行計數，經過統計學泊松分布的校準進行定量。數字以靈敏度和準確度測量突變的變異程度、檢測稀有的DNA靶拷貝以及解析拷貝數變?異狀態。蘇州全自動多重數字PCR分析應用

數字PCR是定量技術，基于單分子PCR方法來進行計數的核酸定量，是一種定量的方法。華南地區進口數字PCR技術

精細化學品主要應用于農業、建筑業、紡織業、醫藥業、電子設備等行業。隨著下游各行業的進一步發展，對精細化工材料的需求數量上升，性能要求進一步提高，精細化工行業與下**業之間的關系變得更加緊密。精細化工中間體產品**性強，需要建立特定銷售渠道，能否與客戶保持長期業務合作，將對服務型企業日常經營和長遠發展構成重大影響。精細化工中間體的質量和純度直接影響到終端產品的性能和品質。近年來，世界主要大型農藥、醫藥生產企業為了節省銷售研發支出，提高效率，降低危險，紛紛將產品戰略的重點集中于**終產品的研究和市場開拓，而將涉及大量專有技術的中間體轉向對外采購，充分利用外部的優勢資源，重新確認、配置企業的內部資源。隨著社會經濟的進一步發展，人們對電子、汽車、機械工業、建筑新材料、新能源及新型環保材料的需求將進一步上升，電子與信息化學品、表面工程化學品、醫藥化學品等將得到進一步的發展，全球范圍內精細化學品市場規模將保持高于傳統化工行業的速度飛速增長。華南地區進口數字PCR技術

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