現代分子生物學技術的迅速發展和科技的進步,特別是隨著后基因組時代的到來,人們已經能夠根據需要建立各種細胞模型,為在體研究基因表達規律、分子間的相互作用、細胞的增殖、細胞信號轉導、誘導分化、細胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物學條件。然而,盡管人們利用現有的分子生物學方法,已經對基因表達和蛋白質之間的相互作用進行了深入、細致的研究,但仍然不能實現對蛋白質和基因活動的實時、動態監測。在細胞的生理過程中,基因、尤其是蛋白質的表達、修飾和相萬作用往往發生可逆的、動態的變化。目前的分子生物學方法還不能捕獲到蛋白質和基因的這些變化,但獲取這些信息對與研究基因的表達和蛋白質之間的相互作用又至關重要。因此,發展能用于、動態、實時、連續監測蛋白質和基因活動的方法是非常必要的。使用雙光子顯微鏡觀察標本的時候,只有在焦平面上才有光漂白和光毒性。共聚焦多光子顯微鏡研究
隨著生物分子光學標記技術的不斷進步,光學技術在揭示生命活動基本規律的研究中正發揮越來越重要的作用,也為醫學診療提供了更多、更有效的手段。生物醫學光學是近年來受到國際光學界和生物醫學界關注的研究熱點,在生物活檢、光動力、細胞結構與功能檢測、基因表達規律的在體研究等問題上取得了一系列研究成果,目前正在從宏觀到微觀上對大腦活動與功能進行多層面的研究。細胞重大生命活動(包括細胞增殖、分化、凋亡及信號轉導)的發生和調節是通過生物大分子間(如蛋白質-蛋白質、蛋白質-核酸等)相互作用來實現的。蛋白質作為基因調控的產物,與細胞和機體生理過程代謝直接相關,深入研究基因表達及蛋白質-蛋白質相互作用不僅能揭示生命活動的基本規律,同時也能深入了解疾病發生的分子機理,進而為尋找更有效的藥物分子、提高藥物篩選和藥物設計的效率提供新的方法和思路。Ultima 2P Plus多光子顯微鏡應用多光子顯微鏡作為一種研究微觀結構和功能的技術,在眾多領域得到了普遍的應用。
根據阿貝成像原理,許多光學成像系統是一個低通濾波器,物平面包含從低頻到高頻的信息,透鏡口徑會限制高頻信息通過,只允許一定的低頻通過,因此丟失了高頻信息會使成像所得圖像的細節變模糊,降低分辨率。對于三維成像來說,寬場照明時得到的信息不僅包含物鏡焦平面上樣品的部分信息,同時還包含焦平面外的樣品信息。由于受到焦平面外的信息干擾,常規熒光顯微鏡無法獲得層析圖像。三維結構光照明顯微鏡能夠提高分辨率、獲得層析圖像,是因為利用特定結構的照明光能引入樣品的高頻信息,當結構光的空間頻率足夠高時,只有靠近焦面的部分才能被結構光調制,超出這一區域,逐漸轉變為均勻照明,也就是只有焦面附近的有限區域具有相對完整的頻譜信息,離焦后,高頻信息迅速衰減,所以使用高頻結構光照明可以區分焦面和離焦區域來獲得層析圖像。然后再通過軸向掃描可以獲取樣品不同深度的焦面圖像,重建樣品的三維結構。
因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司雙光子顯微鏡的基本原理是:在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子,在經過一個很短的所謂激發態壽命的時間后,發射出一個波長較短的光子;其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發熒光分子是相同的。雙光子激發需要很高的光子密度,為了不損傷細胞,雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脈沖寬度只有100飛秒,而其周期可以達到80至100兆赫茲。在使用高數值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時,物鏡的焦點處的光子密度是比較高的,雙光子激發只發生在物鏡的焦點上,所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦***,提高了熒光檢測效率。OCT可以用于損傷修復監測。Yeh等用OCT、多光子顯微鏡。
作為一個多學科、知識密集型和資金密集型的高科技產業,多光子顯微鏡涉及醫學、生物學、化學、物理學、電子學、工程學等多個學科。其生產工藝相對復雜,進入門檻較高。它是衡量一個國家制造業和高科技發展水平的重要標準之一。在過去的五年里,多光子顯微鏡的市場是集中的。由于投產成本高,技術難度大,目前涌現的新企業并不多。顯微鏡作為傳統的高科技產業,并沒有被其他技術顛覆,而是一直在不斷融合發展相關技術,在醫療等精密檢測領域發揮更大的作用。顯微鏡的商業化發展已進入成熟階段,主要需求來自教學、生命科學研究和精密測試等。全球市場呈現溫和增長趨勢。而顯微鏡產品(如多光子顯微鏡、電子顯微鏡)正在刺激市場需求,多光子顯微鏡市場發展潛力巨大。多光子顯微鏡銷售渠道分析及建議。Ultima 2P Plus多光子顯微鏡應用
多光子顯微鏡在基礎科學和臨床診斷領域的應用范圍正在持續增長。共聚焦多光子顯微鏡研究
SternandJeanMarx在評論中說:祖家能夠在更為精細的層次研究樹突的功能,這在以前是完全不可能的。新的技術(如腦片的膜片鉗和雙光子顯微使人們對樹突的計算和神經信號處理中的作用有了更好的理解。他們解釋了是樹突模式和形狀多樣性,及其獨特的電、及其獨特的電化學特征使神經元完成了一系列的專門任務。雙光子與共聚焦在發育生物學中的應用雙光子∶每2.5分鐘掃描一次,觀察24小時,發育到桑椹胚和胚泡階段共聚焦∶每15分鐘掃描一次,觀察8小時后細胞分裂停止,不能發育到桑椹胚和胚泡階段共聚焦激發時的細胞存活率為多光子系統的10~20%。共聚焦多光子顯微鏡研究