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在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)已成為不可或缺的工具,廣泛應(yīng)用于基因擴(kuò)增、突變檢測(cè)、基因表達(dá)分析等多個(gè)領(lǐng)域。而一款PCR Master Mix則是確保實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一。Phusion Master Mix (2×) (Without Dye)憑借其性能和獨(dú)特的產(chǎn)品特點(diǎn),為科研工作者提供了高效、可靠的實(shí)驗(yàn)解決方案。一、酶性能Phusion Master Mix的成分是Phusion DNA聚合酶,這是一種具有高保真性的熱穩(wěn)定酶。它能夠以極高的準(zhǔn)確性復(fù)制DNA模板,錯(cuò)誤率極低,為普通Taq酶的1/500,這使得它在擴(kuò)增長(zhǎng)片段DNA或?qū)π蛄袦?zhǔn)確性要求極高的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色。例如,在進(jìn)行基因克隆或構(gòu)建基因文庫(kù)時(shí),Phusion酶能夠確保擴(kuò)增產(chǎn)物的序列與原始模板高度一致,從而提高了后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功率。二、快速擴(kuò)增能力盡管Phusion酶具有高保真性,但其擴(kuò)增速度并未受到影響。它能夠在短時(shí)間內(nèi)完成長(zhǎng)片段DNA的擴(kuò)增,提高了實(shí)驗(yàn)效率。對(duì)于長(zhǎng)度在5kb以內(nèi)的DNA片段,Phusion Master Mix可以在幾分鐘內(nèi)完成擴(kuò)增,這對(duì)于需要快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果的研究人員來說是一個(gè)巨大的優(yōu)勢(shì)。例如,在進(jìn)行高通量基因篩查或大規(guī)模樣本分析時(shí),Phusion Master Mix能夠縮短實(shí)驗(yàn)周期,提高工作效率。將合成的gRNA與Cas9 NLS蛋白混合,形成復(fù)合物。由于Cas9 NLS蛋白兩端都有NLS,有助于復(fù)合物快速進(jìn)入細(xì)胞核。Recombinant Biotinylated Mouse IL-17A&F Protein,His-Avi Tag
Hot-Start Taq DNA Polymerase 是一種經(jīng)過改良的Taq DNA聚合酶,專為提高PCR反應(yīng)的特異性和靈敏度而設(shè)計(jì)。它通過結(jié)合一種溫度敏感的抑制劑(如核酸適配體或抗體)來實(shí)現(xiàn)熱啟動(dòng)功能。在室溫下,抑制劑與酶結(jié)合,阻止Taq酶的活性,從而避免因引物錯(cuò)配或二聚體形成導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增。當(dāng)反應(yīng)體系升溫至PCR循環(huán)條件時(shí),抑制劑釋放,酶活性被啟動(dòng),確保反應(yīng)在高溫下特異性進(jìn)行。與普通Taq酶相比,Hot-Start Taq DNA Polymerase 的優(yōu)勢(shì)在于其提高了PCR的特異性和重復(fù)性,同時(shí)減少了因非特異性擴(kuò)增導(dǎo)致的背景信號(hào)。這種酶還支持在室溫下配制反應(yīng)體系,無需額外的高溫啟動(dòng)步驟,簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。此外,Hot-Start Taq DNA Polymerase 適用于多種復(fù)雜的PCR應(yīng)用場(chǎng)景,包括常規(guī)PCR、多重PCR、高GC含量模板擴(kuò)增以及甲基化分析等。例如,某些版本的Hot-Start Taq酶經(jīng)過優(yōu)化,能夠擴(kuò)增經(jīng)過亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的DNA,這對(duì)于表觀遺傳學(xué)研究具有重要意義??傊琀ot-Start Taq DNA Polymerase 通過其獨(dú)特的熱啟動(dòng)機(jī)制,為PCR反應(yīng)提供了更高的特異性和靈敏度,是分子生物學(xué)研究和診斷應(yīng)用中的理想選擇。dCTP Solution(100 mM) 脫氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)Taq PCR Master Mix (2×) (Without Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,廣泛應(yīng)用于常規(guī)PCR擴(kuò)增。
一、主要特點(diǎn):免提取與高兼容性Blood Direct PCR Master Mix (2×) (Without Dye)是一種專為血液樣本設(shè)計(jì)的高效PCR預(yù)混液,能夠直接從全血或干血斑中擴(kuò)增DNA,無需進(jìn)行繁瑣的DNA提取和純化步驟。這種預(yù)混液含有高保真DNA聚合酶(如HemoTaq?或Q5® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase),這些酶經(jīng)過優(yōu)化,能夠耐受血液中的各種抑制劑,包括抗凝劑(如EDTA、肝素、檸檬酸鈉)和濾紙中的化學(xué)物質(zhì)。此外,該預(yù)混液還具備的模板兼容性,能夠從多種抗凝劑保存的血液樣本中直接擴(kuò)增DNA,適用于人類、小鼠等哺乳動(dòng)物的全血樣本。二、性能:高保真性與長(zhǎng)片段擴(kuò)增Blood Direct PCR Master Mix (2×) (Without Dye)的優(yōu)勢(shì)之一是其高保真性。其DNA聚合酶的保真性高于普通Taq酶,接近Pfu DNA聚合酶,能夠確保擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。這對(duì)于需要高精度的基因克隆和測(cè)序?qū)嶒?yàn)尤為重要。此外,該預(yù)混液能夠擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)5kb甚至更長(zhǎng)的DNA片段,適用于多種復(fù)雜的基因組分析。例如,它可以輕松擴(kuò)增人類基因組中的長(zhǎng)片段,如IL-6基因的4882bp片段。
一、產(chǎn)品特點(diǎn)(一)高靈敏度該qPCR Mix采用了先進(jìn)的熱啟動(dòng)Taq酶技術(shù),通過化學(xué)修飾將酶活性鎖定在低溫條件下,在PCR反應(yīng)的高溫變性階段釋放活性。這一特性有效避免了非特異性擴(kuò)增,顯著提高了反應(yīng)的靈敏度,即使對(duì)于低豐度的靶基因,也能實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。例如,在檢測(cè)稀有突變基因時(shí),其高靈敏度能夠確保即使在野生型基因背景中含量極低的突變基因也能被準(zhǔn)確識(shí)別,為病痛早期篩查等研究提供了有力支持。(二)高特異性其獨(dú)特的緩沖體系經(jīng)過優(yōu)化,能夠精確調(diào)控引物與模板的結(jié)合過程。在反應(yīng)過程中,該體系可有效減少引物二聚體的形成,同時(shí)增強(qiáng)引物與目標(biāo)模板的特異性結(jié)合能力。這使得在復(fù)雜的基因組背景下,目標(biāo)基因得以高效擴(kuò)增,從而顯著提高了qPCR反應(yīng)的特異性。在多基因家族成員的區(qū)分檢測(cè)中,這種高特異性優(yōu)勢(shì)尤為明顯,能夠避免因引物錯(cuò)配導(dǎo)致的非目標(biāo)基因擴(kuò)增,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。其快速擴(kuò)增能力和高特異性使其特別適合大規(guī)?;驒z測(cè)、菌落PCR以及微量DNA的檢測(cè)。
在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)已成為基因表達(dá)分析、病毒檢測(cè)和基因定量的重要工具。其中,One Step RT-qPCR SYBR Green Kit憑借其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),成為眾多科研工作者的優(yōu)先試劑盒。簡(jiǎn)化操作流程,降低污染風(fēng)險(xiǎn)One Step RT-qPCR SYBR Green Kit采用一步法反應(yīng)體系,將逆轉(zhuǎn)錄(RT)和qPCR反應(yīng)集成在同一反應(yīng)管中完成。這種設(shè)計(jì)不僅簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作步驟,減少了人為誤差,還有效降低了因反復(fù)開蓋導(dǎo)致的樣品污染風(fēng)險(xiǎn)。例如,傳統(tǒng)的兩步法需要分別進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和qPCR反應(yīng),操作復(fù)雜且污染風(fēng)險(xiǎn)較高,而一步法試劑盒則避免了這些問題。高靈敏度與高特異性該試劑盒使用高效的逆轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,結(jié)合優(yōu)化的反應(yīng)緩沖體系,能夠顯著提高反應(yīng)的靈敏度和特異性。其檢測(cè)靈敏度可達(dá)極低濃度的RNA樣本,例如在某些實(shí)驗(yàn)中,即使RNA濃度低至0.1 pg,也能實(shí)現(xiàn)精細(xì)檢測(cè)。此外,試劑盒中添加了抑制非特異性擴(kuò)增的組分,確保熔解曲線呈現(xiàn)單峰,進(jìn)一步提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I具有特異性識(shí)別能力,能夠識(shí)別雙鏈DNA中的5'-(C/T)CCTT-3'序列。Recombinant Mouse CD7 Protein,hFc Tag
熱啟動(dòng)技術(shù)有效抑制了非特異性擴(kuò)增,使得Hot-Start Taq DNA Polymerase在低拷貝數(shù)模板檢測(cè)中表現(xiàn)出色。Recombinant Biotinylated Mouse IL-17A&F Protein,His-Avi Tag
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,使其成為基因克隆、突變分析和測(cè)序準(zhǔn)備等高精度實(shí)驗(yàn)的優(yōu)先工具。熒光染料的加入是該預(yù)混液的一大亮點(diǎn)。這種染料能夠在PCR過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA的擴(kuò)增情況,通過熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化反映目標(biāo)基因的擴(kuò)增程度。實(shí)驗(yàn)人員無需額外添加染料或進(jìn)行復(fù)雜的后處理,即可直接在PCR儀上觀察擴(kuò)增曲線,從而實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確的定量分析。這種設(shè)計(jì)不僅節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,還減少了人為操作帶來的誤差。此外,Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 的2倍濃度設(shè)計(jì)進(jìn)一步簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)人員只需加入模板DNA和引物,即可直接進(jìn)行反應(yīng),減少了手動(dòng)配制反應(yīng)體系的步驟和可能出現(xiàn)的誤差。