低甲基化，原*基因***正常細(xì)胞中，由于甲基化作用原*基因多處于沉默狀態(tài)，但在多種**細(xì)胞中，均發(fā)現(xiàn)原*基因處于低甲基化狀態(tài)，并且低甲基化狀態(tài)與其蛋白表達(dá)升高密切相關(guān)，表明低甲基化狀態(tài)可使原*基因***。轉(zhuǎn)座子活化轉(zhuǎn)座子是可移動的基因序列，包括LINE-1、HERV-K等，在人類基因組中含量豐富，正常情況下處于被甲基化狀態(tài)而轉(zhuǎn)錄沉默。而在**細(xì)胞中，由于基因組總體甲基化水平的降低，這些序列也因去甲基化而活化，轉(zhuǎn)移位置導(dǎo)致基因片段的插入和缺失。芯片平臺作為目前比較成熟的篩選工具。上海TBSDNA甲基化歡迎咨詢

芯片種類：Agilent**甲基化芯片，8x60K●和合作伙伴在Agilent公司定制的Promoter芯片。●絕大多數(shù)基因是針對基因啟動子區(qū)域的CpG島設(shè)計探針。●芯片上一共有4160個功能注釋比較明確的基因，其中2128個和**發(fā)生有關(guān)系。●從功能上分，有256基因和細(xì)胞凋亡有關(guān)，1273個基因和信號傳導(dǎo)有關(guān)，487個基因和壓力和衰老有關(guān)。●特別適用于**甲基化研究。案例分析：用Agilent定制甲基化芯片和表達(dá)譜芯片共同篩選乳腺*患者的高甲基化基因，并探討甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系為了尋找乳腺*早期診斷的甲基化標(biāo)記基因，探討基因甲基化水平與基因表達(dá)量之間的關(guān)系，科研者使用甲基化芯片和表達(dá)譜芯片進(jìn)行了相關(guān)研究。研究中，甲基化程度檢測使用BSP法和COBRA分析，基因表達(dá)水平檢測用RT-PCR。結(jié)果，在乳腺*患者中檢測到70對高度甲基化差異***的基因，表達(dá)譜芯片分析結(jié)果顯示在乳腺*患者中這70個基因大部分不表達(dá)；RT-PCR結(jié)果也顯示大部分基因表達(dá)量很低甚至不表達(dá)。這種研究策略，能夠直觀方便的篩查患者甲基化基因，有效地尋找乳腺*標(biāo)記基因，對研究甲基化基因調(diào)控基因表達(dá)提供研究基礎(chǔ)。浙江TBSDNA甲基化售后分析6mA在細(xì)菌、藻類及動植物基因組中存在。

強(qiáng)化RRBS——高性價比DNA甲基化檢測方案。單堿基分辨率，全基因組范圍，富集啟動子/CpG島甲基化調(diào)控區(qū)域，適合人和哺乳動物、動物及魚類，適合細(xì)胞、全血及新鮮冷凍組織，不適合cfDNA及FFPE等片段化樣本。項目介紹：簡化基因組甲基化測序(ReducedRepresentationBisulfiteSequencing,RRBS)是通過限制性酶切的方法富集基因組DNA上富含CCGG位點的片段，經(jīng)Bisulfite處理和高通量測序技術(shù)進(jìn)行基因組CpG富集區(qū)域內(nèi)的單堿基分辨率的甲基化測序。相對WGBS而言RRBS技術(shù)作為高性價比的甲基化測序方案，測序量大幅減少，在大規(guī)模臨床樣本研究中具有很不錯的應(yīng)用價值。

**預(yù)防和***的一個手段是通過去甲基化恢復(fù)某些關(guān)鍵的抑*基因或DNA修復(fù)基因的活性，目前研究**多的是DNMTs抑制劑，它通過抑制DNMT活性以逆轉(zhuǎn)異常的DNA甲基化。**個表型修飾藥物為5-azacytidine及其類似物5-aza-2'-deoxycytidine（5-aza-CdR），這類藥物已經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)用于白血病前骨髓增生異常綜合征的***。5-aza-CdR是胞嘧啶的類似物，在DNA復(fù)制過程中可以摻入到DNA鏈中，一方面它可以降低DNA接收甲基的能力，另一方面它抑制DNMT活性，導(dǎo)致DNA甲基化水平的降低。體外和體內(nèi)試驗均表明，5-aza-CdR具有降低超甲基化的抑*基因甲基化水平從而抑制**的能力，臨床表明應(yīng)用5-aza-CdR可提高部分IV期小細(xì)胞肺*患者生存率，但該藥也存在著不可忽視的毒副作用（如特異性不強(qiáng)，不能針對某一特定抑*基因進(jìn)行靶向***；高劑量的5-aza-CdR可能誘發(fā)**的轉(zhuǎn)移），因此其在臨床上的應(yīng)用受到了很大限制。也有研究表明，低劑量的As2O3可起到***肝*的目的。ChIP-Seq 能實現(xiàn)真正的全基因組分析。

芯片平臺作為目前比較成熟的篩選工具，已經(jīng)在很多領(lǐng)域有了相應(yīng)的應(yīng)用。多家芯片公司在DNA甲基化這塊兒有了相應(yīng)的產(chǎn)品提供，其中應(yīng)用**為***的就Agilent平臺和Illumina平臺，相應(yīng)的產(chǎn)品包括Agilent Human CpG Island Microarray Kit，Infinium HumanMethylation27 BeadChip和Infinium HumanMethylation450K BeadChip。另外Roche NimbleGen和Affymetrix也有相應(yīng)的芯片推出，但是NimbleGen的芯片今年下半年已經(jīng)停產(chǎn)不同的芯片平臺，各自的實驗過程也是不一樣的。安捷倫前期采用的甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP）技術(shù)。將基因組DNA分成兩份，一份用來做 MeDIP，另一份作為對照。兩個樣品都標(biāo)記熒光(富集的樣品用Cy5標(biāo)記，對照用Cy3標(biāo)記)，然后與芯片雜交。芯片上每個探針的Cy5/Cy3強(qiáng)度比例顯示出該區(qū)域的甲基化程度。850K芯片為半金標(biāo)準(zhǔn)，價格低，分析簡單，較為適合EWAS類型的課題。山東RRBSDNA甲基化活動

焦磷酸測序技術(shù)服務(wù)基于QIAGEN公司的PyroMark Q96 ID平臺。上海TBSDNA甲基化歡迎咨詢

全基因組甲基化測序（Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS）是將重亞硫酸鹽Bisulfite處理和高通量測序技術(shù)相結(jié)合，對有參考基因組進(jìn)行全基因組范圍的單堿基分辨率的甲基化測序，是DNA甲基化檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。WGBS滿足全基因組DNA甲基化圖譜及疾病關(guān)聯(lián)分析、基因調(diào)控分析、疾病的甲基化標(biāo)志物篩選等探索性課題的研究。技術(shù)優(yōu)勢：DNA甲基化檢測**有力的工具，單堿基分辨率，檢測每個C堿基的甲基化狀態(tài)，全基因組范圍，**限度地獲得甲基化信息，適合所有有參考基因組的物種適合各種類型的樣本。上海TBSDNA甲基化歡迎咨詢