亞硫酸氫鹽測序PCR(BSP)：這種方法一度被認為是DNA甲基化分析的金標準。它的過程如下：經過亞硫酸氫鹽處理后，設計引物進行PCR擴增目的片段，并對PCR產物進行克隆測序，將序列與未經處理的序列進行比較，判斷CpG位點是否發生甲基化。這種方法可靠，且精確度高，能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態，但因為涉及到測序，其結果準確但要求克隆時所挑克隆較多，操作繁瑣，不易大批量操作。另外，甲基化程度的定量依賴于挑選克隆的數目，因此這種方法只能算得上是一種半定量的技術方法。目前一般會先用BSP找到甲基化位點，然后根據甲基化位點設計MSP引物，進行相應PCR條件摸索，以用于大量樣本的篩選。不同的芯片平臺，各自的實驗過程也是不一樣的。江蘇RRBSDNA甲基化售后分析

甲基化研究項目各學科細分分析：從各學科細類中標金額和中標數量分析，**學依然是甲基化研究的熱點方向，該方向總計中標金額2217萬元，中標數量57項。其它細分學科包括預防醫學、遺傳學與生物信息學、檢驗醫學也占有不少份額。甲基化研究項目各單位中標情況分析：經過整理，甲基化項目類中標單位共105家單位，按中標項目金額排列如下（截取部分超過百萬的項目）。甲基化研究方向細分熱點分析："游離DNA甲基化"、"m6A-RNA甲基化"，“羥甲基化”等均是甲基化研究方向的重點關注內容。尤其值得關注的是m6A相關研究近年來呈直線上升態勢，成為國自然的熱點。浙江oxBSDNA甲基化專業服務在哺乳動物中CpG以兩種形式存在。

DNA甲基化在**中的作用主要表現在以下幾個方面：一是甲基化的CpG島二核苷酸中的胞嘧啶以較高的頻率脫氨基變成胸腺嘧啶，造成堿基突變；二是抑*基因和DNA修復基因由于超甲基化而沉默；三是*基因甲基化水平降低而活化；四是基因組總體甲基化水平降低使轉座子、重復序列活化導致染色體穩定性下降。這些因素是導致**發展、轉移、惡化**終導致患者死亡的重要原因。其中后三個方面源于甲基化水平的改變，而甲基化的過程是可逆的，因此可以甲基化位點為靶點，靶向用藥進行**的預防、***。

DNA甲基化對基因表達調控起著動態的重要作用。 借助MethylationEPIC BeadChip，研究人員可以基于單核苷酸分辨率定量檢測基因組中的850,000多個甲基化位點。包括FFPE在內的多重樣本可以并行分析，以便在每樣本比較低成本的情況下實現高通量功能。依托業界**的Infinium實驗分析方法，MethylationEPIC BeadChip是全表觀基因組關聯研究(EWAS)的理想之選。它提供了由**精選的***的覆蓋范圍，囊括99%的RefSeq基因，95%的CpG島，高覆蓋度的增強子區域和其他內容類別。由于超過90%的Infinium HumanMethylation450K位點內容都涵蓋在內，因此新一代MethylationEPIC試劑盒對這些位點也完全支持。焦磷酸測序技術是甲基化檢測新的金標準。

甲基化DNA免疫沉淀測序（MethylatedDNAImmunoprecipitationSequencing，MeDIP-Seq）是通過5mC特異性抗體富集甲基化的DN**段，然后結合高通量測序技術在全基因組水平上以較小的數據量，快速、高效地尋找甲基化區域。可廣泛應用于甲基化與疾病關系研究。樣本要求：基因組DNA:>=3ug；樣品濃度>50ng/ul；無RNA和蛋白污染，建庫測序：測序策略：IlluminaHiSeq,PE150;測序深度：20-30Mreads。信息分析：基于全基因組范圍的羥甲基化分析，數據質控，Peak鋒Calling，Peak鋒在基因組、染色體、功能元件上的分布，多樣本羥甲基化差異聚類，差異羥甲基化DMR鑒定及相關基因的功能分析，結合項目背景和科學問題的數據亮點挖掘。WGBS技術及應用是有力方案。浙江cfDNA甲基化DNA甲基化專業服務

全基因組甲基化測序是將重亞硫酸鹽Bisulfite處理和高通量測序技術相結合。江蘇RRBSDNA甲基化售后分析

第三代測序技術的出現，更是讓甲基化的直接測定成為可能。一年前，美國PacificBiosciences公司利用獨有的單分子實時(SMRT)測序技術，直接測定了DNA的甲基化。這項成果發表在《NatureMethods》雜志上。甲基化特異性PCR（MS-PCR）：DNA在亞硫酸氫鹽作用后，DNACpG若無甲基化，則序列中的C改變為U，若有甲基化則保持不變，因此從理論上講，用不同的引物做PCR，即可檢測出這種差異，從而確定基因有無CpG島甲基化。因此根據目的基因修飾前后的改變，就可以相應設計M和U引物，有時我們需要設計兩輪引物。這種方法靈敏度高，無需特殊儀器，因此經濟實用，是目前應用**為***的檢測方法。不過也存在一定的局限性，預先需要知道待測片段的DNA序列，引物的設計非常重要。另外，亞硫酸氫鹽處理也十分關鍵，若處理不完全則可能導致假陽性的出現。江蘇RRBSDNA甲基化售后分析