數字PCR技術的原理非常簡單，然而在樣品分散（divide）的環節上卻遇到了無法突破的瓶頸。早期的dPCR嘗試使用96孔板到384孔板甚至1536孔板作為分散反應的載體，或者采用類似流式技術的磁珠乳液擴增方法(BEAMing-Beads, Emulsion, Amplification, Magnetics)，2006年 Fluidigm公司推出了***臺商品化的基于芯片的商品化數字PCR系統。2008年德國 Inostics 推出基于磁珠法乳濁液擴增和流式檢測方式的BEAMing dPCR 檢測服務，但這些方法無論在分散程度和數據群體的體量上都無法達到更加精細的要求，時間和耗材成本嚴重限制了dPCR技術的發展。提高檢測自動化程度，實現一鍵式檢測的自動化檢測流程。廣東PCR數字PCR

ddPCR主要有Bio-rad公司開發的QX200系統和Rain Drop系統，QX200可以將體系分割成2萬個微滴，Rain Drop可以分割成100萬-1 000萬個微滴。ddPCR原理是通過將一個待分析的PCR反應體系進行微滴化處理，利用微滴發生器制成近20 000個油包水小微滴從而對原始體系進行分割，樣品中的核酸分子隨機分配到大量**的微滴中，每個微滴中含有一個或不含待檢核酸分子。對微滴體系進行擴增反應以后，分析每個微滴的熒光信號，進行有或無的判斷，將判斷結果按照泊松分布的原理，通過讀取靶標和內參核酸的陽性微滴個數以及比例從而得到靶分子的拷貝數及濃度。與芯片式dPCR相比，操作簡單，可以實現高通量的檢測，也保證一定程度上的微滴檢測穩定性。北京高精確度數字PCR經驗豐富良好的引物探針設計是數字PCR實驗獲得成功的關鍵因素之一。

數字PCR通過在一定體積內稀釋DNA分子，實現DNA分子計數，從而提供了高精度拷貝數的估算。數字PCR技術在突破PCR擴增效率限制的同時，結果也有很高的重現性。和傳統PCR相比，數字PCR技術檢測遺傳稀有突變時具有更高的靈敏度，在對于低水平痕量DNA分析也有更可靠的結果。數字PCR具有高敏感度、***定量、高特異性、使用標本用量少等特點，可以為臨床提供更客觀、自動化程度更高的定量檢測結果，而且較好的克服了**組織包埋標本DNA質量差、標本量有限等問題，目前已經被應用于多個研究領域，有望成為惡性**的診斷和監測的可靠工具。

數字PCR 的定量方法不依賴于擴增曲線的循環閾值，因此不受擴增效率的影響，也不必采用看家基因和標準曲線，具有很好的準確度和重現性，可以實現***定量分析。在未來十年內，醫學保健的目標是提供質量高效的個性化醫療。PCR 方法會在實現這個目標的過程中發揮重要作用。相比于傳統的PCR，數字PCR 技術有著無可比擬的優勢和***的應用前景。應用領域：突變/稀有變異檢測（Mutation/Rare variant detection）拷貝數變異（Copy-number variation）進入外周循環（包括血液和糞便）的**組織核酸分析無創產前篩查轉化移植檢測藥理學（Pharmacogenetics）基因表達分析（Geneexpression analysis）-特別針對單細胞或少量細胞或者血清血漿樣品線粒體拷貝數分析與線粒體突變分析數字PCR可以驗證二代測序(NGS)。微反應單元體積大小一致且穩定是泊松分布準確計算的前提。

液滴數字PCR源于乳液PCR( emulsion PCR) 技術，即將DNA模板與連接引物的磁性微球以極低的濃度(比如單拷貝) 包裹于油水兩相形成的納升至皮升級液滴中進行 PCR 擴增，擴增后的產物富集在磁性微球上，收集破乳后進行測序。通過油水兩相間隔得到的以液滴為單位的 PCR 反應體系，比微孔板和 IFC 系統更容易實現小體積和高通量，而且系統簡單，成本低，因此成為理想的數字PCR技術平臺。Vogelstein 及其同事提出的 BEAMing 技術就是一種基于乳液PCR的數字PCR系統。Lu 等也采用 BEAMing 和連接酶反應實現對 mRNA 的定量分析。Zhou 等在 BEAMing PCR 擴增后破乳，將連接不同產物的磁珠包被在聚丙烯酰胺凝膠中制成磁珠陣列進行熒光檢測。腦癱患兒mtDNA拷貝數變化CNV檢測。上海準確數字PCR怎么樣

整個實驗過程需嚴格按照標準流程進行實驗操作。廣東PCR數字PCR

肺*的EGFR突變檢測：EGFR突變目前已成為非小細胞肺*（Non-Small-Cell Lung Cancer，NSCLC）患者常規的伴隨診斷，對于EGFR酪氨酸激酶抑制劑（TKI）的使用具有重要的指導作用。然而，由于多數NSCLC都處于晚期，很難取到足夠的**組織完成該檢測，不方便對患者的療效和耐藥情況進行動態監測。相反，血液、胸水以及腦脊液之類的體液標本中會含有**來源的DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA），它們更容易獲取，被認為是組織標本的有效替代品。由于體液標本中ctDNA的含量非常低，因此對檢測方法提出了很高的要求。近年來，有研究者證實，數字PCR的檢測敏感性可以低至0.04%，EGFR突變的血漿檢測與組織學檢測能夠有很好的吻合性，相比于傳統的檢測方法，數字PCR可以***提高血漿中EGFR突變的檢出率。此外，利用數字PCR***定量的優勢，可以對血漿中EGFR突變的豐度進行動態監測，這種動態變化與患者使用TKI的療效密切相關，可以更好的指導患者的***。隨著越來越多循證醫學證據的出現，NSCLC的血液EGFR突變檢測正在成為ddPCR相當有前景的應用方向。廣東PCR數字PCR