industryTemplate對模板量要求高，過多會導致無法定量，過少會導致信號過低。四川數字PCR經驗豐富

與傳統qPCR技術相比，數字PCR技術具有極高的靈敏度、特異性和精確性，但截止目前而言，數字PCR對廣大科研工作者仍然是一種全新的檢測方法，我們在看待數字PCR的應用前景時，更應該保持一種開放的心態，與其說數字PCR技術是一個新的檢測平臺，不如把它視為一種全新的技術思路和手段，在這個平臺上必將有更多的應用幫助我們深入到分子生物學研究的更高層次。數字PCR被稱為第三代PCR技術，相比于傳統的PCR技術和熒光定量PCR技術，其具有諸多優勢：（1）***定量，不依賴標準品和參考曲線，定量結果更加準確可靠；（2）高靈敏度，可實現單分子級檢測；（3）高分辨率，適合在大量背景模板的干擾下對罕見的目標分子進行檢測；（4）高穩定性，對抑制劑的耐受程度**增強。憑借這些優勢，數字PCR被廣泛應用于多個不同的領域[4]，特別是生物醫學領域，包括稀有突變檢測、基因拷貝數變異檢測、基因表達研究、甲基化水平檢測、**液體活檢、無創產前檢測、微生物（病毒、細菌等）檢測、移植排斥監控和二代測序輔助建庫等。此外，此技術也被用于農業、食品安全和環境科學等諸多領域。上海數字PCR數字PCR售后服務對干擾分子（背景信號、PCR抑制劑等）耐受度高，通過信號的“有”“無”定量而不是Ct值。

數字PCR (Digital PCR) 技術作為新一代核酸檢測和***定量技術，目前在痕量核酸樣本檢測、復雜樣本稀有突變檢測和微小表達差異鑒定等方面表現出的優勢已被普遍認可。NGS和CRISPR等分子生物學技術的發展，為數字PCR技術在microRNA研究、基因組拷貝數精細鑒定、致病微生物鑒定、轉基因成分鑒定及基因細胞***等諸多領域帶來了新的契機。良好的引物探針設計是數字PCR實驗獲得成功的關鍵因素之一。這正是眾多研究人員選擇LNA（鎖核酸技術）的原因——LNA修飾的引物和探針采用了成熟可靠的算法設計，獲得了全世界科學家的信賴。

PCR擴增效率的高低直接影響**終信號的判讀和實驗結果分析。在進行熱循環實驗時，需檢查樣品的密封性以及PCR反應板是否和PCR儀熱蓋完全接觸，確保PCR過程中樣品反應液沒有蒸發。QIAcuity數字PCR系統采用**的微反應腔室封閉方式，固態的物理分割和封閉可有效避免PCR過程中微反應體系的水分蒸發，確保微反應體系中樣本反應液濃度的恒定，更易實現準確和精確的定量。原始數據中往往發現陽性信號與陰性背景之間存在許多弱陽性信號。因此需要對引物探針進行重新設計和優化（詳見引物探針優化設計）或提升退火溫度（探針通常比引物高5~10℃），以消除疑似熒光信號的“雨區“現象；此外，陽性信號和陰性背景間隙過小，導致**終結果無法準確判讀。因此需要調整引物探針濃度（建議總反應體系引物濃度為600~800nM；探針濃度為200-400nM）或5' 端**個堿基如有G出現，則將其互補序列設計為實驗所用探針，以提高陰陽性信號間隙，便于分析結果的準確判讀。一體化全自動的QIAcuity數字PCR系統很大程度解放了實驗人員的雙手，同時又避免由于手動操作而引入的誤差。

常規PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數的標準DNA制定標準曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異，從而影響定量結果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可以進行***定量。dPCR也有一些缺點，數字PCR系統成本高，通量有限、操作繁瑣等不足。芯片式dPCR由于芯片加工成本高，系統復雜度高，使得商業化優勢不是特別明顯，特別是目前大多數分子診斷qPCR也能夠很好的滿足需求，dPCR增加的收益成本比并不算高。液滴式相對芯片式成本有所下降，但典型的液滴式dPCR液滴形成和PCR擴增和檢測都分別在不同儀器中完成，增加了很多操作，也增加了系統的復雜性，從這點上看全自動熒光定量PCR做的更好。目前有超過130萬條經鎖核酸修飾的引物，提供至少3種設計方案以滿足不同跨外顯子區域的檢測需求。四川數字PCR經驗豐富

基因豐度非常低的，或者樣本濃度低的，可以選擇數字化PCR。四川數字PCR經驗豐富

CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證：CRISPR-Cas9技術的發明，是基因編輯技術的一大突破，但如何驗證實驗是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數字PCR技術可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發明了以CRISPR為基礎的SHERLOCK技術可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評估時仍采取了數字PCR進行確認。*****的伴隨診斷：常用體液來源（如血液，胸腹水，唾液及尿液等）的待檢標本中的DNA，有正常脫落體細胞和病變脫落細胞兩種來源，前者的量遠大于后者。通過微液滴處理能在每個微液滴中有效減少正常體細胞DNA的干擾，實現**標記物的有效檢測，如EGFR，ALK，ROS1，KRAS、BRAF等基因的突變檢測、乳腺*/胃*的HER2基因擴增檢測等，應用于**精細醫學的伴隨診斷。四川數字PCR經驗豐富