對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品技術問題，歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號：Mine-Bio，查看更多技術文章！用PEI轉(zhuǎn)染時，一般和DNA的比例會是多少?25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。若有更多關于PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物。25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例PEI轉(zhuǎn)染試劑可以轉(zhuǎn)染哪些細胞？

細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2、制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報告基因的表達。

PEI在于可以應用于體內(nèi)試驗。當初試驗經(jīng)費很有限，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000，選擇PEI，以至于相當長的時間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點：1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中，順序不可錯，輕微混勻，靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當提高。PS：事實證明，PEI是可行的，已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了。更多關于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關的信息，可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司！更多關于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！用PEI轉(zhuǎn)染時，一般和DNA的比例是?

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。如有更多關于PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑相關問題，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么？25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價比較高？25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm濾膜過濾，儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水，加入20ml1M的HEPES，調(diào)pH值到7.4，定容至1L，過濾（0.2μm濾膜）后儲存于4℃?zhèn)溆谩７椒ǎ?．細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。歡迎咨詢上海曼博生物。25KPEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例