腎臟微環(huán)境中生物打印神經(jīng)母細(xì)胞瘤**模型

來源：發(fā)布時間：2025-06-27

研究人員利用生物打印技術(shù)，構(gòu)建了由 IMR-32 神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（含 MYCN 和 ALK 基因擴(kuò)增）與人胚腎 293 細(xì)胞及原代人腎成纖維細(xì)胞組成的腎臟微環(huán)境 3D 模型，該模型通過商用生物打印機(jī)的雙氣動擠壓打印頭制作。實驗中，泛巴諾司他（一種組蛋白去乙酰化酶抑制劑）在有效濃度范圍內(nèi)可選擇性誘導(dǎo)*細(xì)胞凋亡，且不影響腎臟細(xì)胞，而殺稻瘟菌素對兩種細(xì)胞均有細(xì)胞毒性。此外，2D 和 3D 培養(yǎng)的細(xì)胞敏感性存在細(xì)胞類型特異性差異，3D 模型的***窗口更寬，證明了人類 3D 模型在***藥物研究中的價值，此模型可用于測試新***藥物的細(xì)胞毒性和**選擇性，其開放支架設(shè)計還能自由更換**和微環(huán)境細(xì)胞類型。

思維導(dǎo)圖

一、研究背景與目的· 背景：當(dāng)前***藥物研發(fā)受限于動物模型中人類*細(xì)胞處于異種環(huán)境，神經(jīng)母細(xì)胞瘤作為兒童**常見顱外實體瘤，存在化療耐藥和高危患者早期死亡等問題，且腎轉(zhuǎn)移***進(jìn)展有限。

· 目的：構(gòu)建全人源腎臟微環(huán)境中的神經(jīng)母細(xì)胞瘤 3D 生物打印模型，用于高效測試***藥物的細(xì)胞毒性和**選擇性。二、模型構(gòu)建與方法· 細(xì)胞類型

· *細(xì)胞：IMR-32（含 MYCN 和 ALK 基因擴(kuò)增的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）。

· 腎臟微環(huán)境細(xì)胞：人胚腎 293 細(xì)胞、HEK293-GFP 細(xì)胞、原代人腎成纖維細(xì)胞。

· 生物墨水：6.67% 明膠 + 4.5% 海藻酸鈉，與細(xì)胞懸液混合后含 3% 明膠、2% 海藻酸鈉、30 mM CaSO?，細(xì)胞濃度 5×10? cells/mL。

· 打印技術(shù)：使用 Bio X Cellink 生物打印機(jī)，雙氣動擠壓打印頭，構(gòu)建**（直徑 3 mm）為*細(xì)胞、外層（直徑 6 mm）為腎臟細(xì)胞的環(huán)形結(jié)構(gòu)，打印后用 100 mM CaCl?交聯(lián) 10 分鐘。

三、藥物測試結(jié)果

· 泛巴諾司他（HDAC 抑制劑）

· 3D 模型：IMR-32 細(xì)胞 IC50 在 24-72 小時為 2.1-7.5 nM，HEK293 細(xì)胞為 107-509 nM，原代腎成纖維細(xì)胞 72 小時 IC50 為 158.9 nM，*細(xì)胞敏感性比腎臟細(xì)胞高約 2 個數(shù)量級，10 nM 即可誘導(dǎo)*細(xì)胞凋亡，腎臟細(xì)胞*在 1000 nM 時少量死亡。

· 2D 培養(yǎng)：IMR-32 細(xì)胞 IC50 為 2.5-4.9 nM，HEK293 細(xì)胞為 38.5-40.5 nM，敏感性差異約 1 個數(shù)量級。

· 殺稻瘟菌素（***）

· 3D 與 2D：對 IMR-32 和 HEK293 細(xì)胞 IC50 值相近，無***細(xì)胞類型差異，3D 中 72 小時 IC50 分別為 12.4 μM 和 15.1 μM，2D 中為 3.9 μM 和 5.0 μM。

四、模型優(yōu)勢與意義

· 與 2D 對比：3D 模型中藥物***窗口更寬，能更準(zhǔn)確反映細(xì)胞在生理微環(huán)境中的反應(yīng)。

· 生理相關(guān)性：使用原代腎成纖維細(xì)胞替代 HEK293 細(xì)胞，增強了模型的病理生理相關(guān)性。

· 應(yīng)用價值：可區(qū)分**特異***物（如泛巴諾司他）和非特異性細(xì)胞毒***物（如殺稻瘟菌素），支持個性化***和新藥物開發(fā)，遵循 “3R” 原則減少動物實驗。

五、關(guān)鍵數(shù)據(jù)表格

關(guān)鍵問題

1. 生物打印的神經(jīng)母細(xì)胞瘤 3D 模型相比傳統(tǒng) 2D 培養(yǎng)有何優(yōu)勢？

答案：3D 模型中細(xì)胞對藥物的敏感性存在細(xì)胞類型特異性差異，***窗口更寬。例如，泛巴諾司他在 3D 模型中對 IMR-32 細(xì)胞的 IC50 值比 HEK293 細(xì)胞低約兩個數(shù)量級，而 2D 中*低約一個數(shù)量級，3D 模型更能模擬體內(nèi)**微環(huán)境，準(zhǔn)確反映藥物在生理環(huán)境中的效果。

2. 泛巴諾司他和殺稻瘟菌素在模型中的作用有何不同？

答案：泛巴諾司他是組蛋白去乙酰化酶抑制劑，可選擇性誘導(dǎo) IMR-32 細(xì)胞凋亡，在 10-100 nM 濃度下殺死*細(xì)胞，且不影響腎臟細(xì)胞；殺稻瘟菌素是肽基核苷***，對 IMR-32 和腎臟細(xì)胞均有細(xì)胞毒性，無選擇性，3D 和 2D 培養(yǎng)中兩者 IC50 值相近。

3. 該模型在***藥物研發(fā)中的潛在應(yīng)用有哪些？

答案：可用于測試新***藥物的細(xì)胞毒性和**選擇性，如篩選對*細(xì)胞特異性殺傷而不損傷正常細(xì)胞的藥物；能通過更換**和微環(huán)境細(xì)胞類型，適應(yīng)不同**研究；還可結(jié)合患者來源的腫瘤細(xì)胞，開發(fā)個性化***策略，減少動物實驗使用。

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