免疫組化如何才能充分脫蠟?
(1)蠟不溶于水,如果脫蠟不干凈,少許蠟存留于切片上,將會引起染色不均勻、陽性物時隱時現、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問題,切片在染色前必須徹底脫蠟,目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯,因它脫蠟力強,脫蠟時間較短;
(2)脫蠟的時間要根據季節,室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天,室溫較高,脫蠟試劑也新鮮,則脫蠟時間不需很多,3-5分鐘就已足夠。如果在冬天,室溫較低,脫蠟試劑也較陳舊,則脫蠟時間需要延長,10-20分鐘或更長。
(3)當天切的切片,燒烤2小時后進行染色,切片帶有溫度進行脫蠟這將可加速脫蠟的過程,如果預先切好烤好的切片,在染色前,還必須對切片進行加溫10-20分鐘,然后再行脫蠟,這樣脫蠟速度加快,效果魁偉更好。總之,操作時應根據不同的季節,不同的室溫,不同的試劑來決定,脫蠟的時間,原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。
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確定來源不明的轉移瘤的原發部位,臨床上免疫組化也可以進行操作。對于來源不明的轉移瘤,用免疫組化技術有助于確定惡性cancer的組織學來源,進一步確定原發部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫療及預后提供了依據。靠譜免疫組化要多久病理報告中的免疫組化到底有什么作用?
免疫組化中免疫膠體金技術,英瀚斯生物小編為您說明介紹。免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩定地吸附蛋白,對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進行光鏡觀察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。
免疫組化的顯色系統
免疫組化的顯色系統是將抗原-抗體反應轉化為可見信號的關鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統有DAB(3,3'-二氨基聯苯胺)和AEC(3-氨基-9-乙基咔唑)。DAB顯色產生棕色沉淀,適用于光學顯微鏡觀察。AEC顯色產生紅色沉淀,適用于光學顯微鏡觀察,但不適合長期保存。此外,還有熒光顯色系統,如FITC(異硫氰酸熒光素)和TRITC(四甲基羅丹明異硫氰酸酯),適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統需要考慮實驗目的和檢測設備。 英瀚斯生物,組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報告分析,一站式搞定!
免疫組化的質量控制免疫組化的質量控制是確保實驗結果可靠性和重復性的關鍵步驟。質量控制包括實驗前的抗體驗證、實驗中的陽性對照和陰性對照,以及實驗后的結果評估。抗體驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達目標蛋白的組織或細胞,確保實驗系統的有效性。陰性對照是使用不表達目標蛋白的組織或細胞,排除非特異性結合。結果評估是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估,確保實驗結果的可靠性。免疫組化流程是什么樣的?江西細胞免疫組化可以做什么
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細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟
1、選擇貼壁良好的細胞爬片,用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次,每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內源性過氧化物酶。
4、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封閉20min(封閉電荷)。
5、去除BSA液,每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織,4℃過夜。
6、PBS洗3次,每次5min。
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7、去除PBS液,每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗,4℃孵育50min。
8、PBS洗3次,每次5min。
9、去除PBS液,每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液,顯微鏡控制顯色。
10、顯色完全后,蒸餾水或自來水沖洗,蘇木素復染,1%鹽酸酒精分化(1s),自來水沖洗,氨水返藍,流水沖洗。
11、切片經過梯度酒精(70-100%)10min一個梯度,脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封固。 江蘇免疫組化哪家好