免疫組化的基本原理 

免疫組化（Immunohistochemistry, IHC）是一種利用抗原-抗體特異性結合的原理，通過顯色反應在組織切片上定位特定蛋白質的技術。該技術結合了免疫學和組織學的優點，能夠在細胞或亞細胞水平上精確顯示目標蛋白的分布和表達情況。免疫組化的基本原理是利用一抗與目標蛋白結合，再通過二抗與一抗結合，通過顯色系統（如DAB）使目標蛋白可視化。這種方法不僅能夠提供蛋白質的定位信息，還能通過半定量分析評估蛋白質的表達水平。 做免疫組化需要多少錢？寧夏做得好的免疫組化要多久

免疫組化的局限性：在病理診斷中，隨著各種抗體新的用途不斷被發現及越來越多的新型抗體的出現，免疫組化在病理診斷和醫療中已有了很重要的位置，對于cancer診斷、鑒別診斷、分類及諸多方面產生了重大的影響。但是免疫組化技術還存在著缺陷和不足，作為病理醫生和病理技術人員不僅要充分認識到缺陷和不足，而且要努力避免由于缺陷和不足給診斷帶來的誤區，這就要求病理醫生和病理技術人員在工作中不斷學習與研究，在實際操作中總結經驗教訓，分析失敗原因，努力實現操作規范化、標準化，才能充分發揮免疫組化在病理診斷及鑒別診斷、臨床醫療中的指導作用。吉林切片免疫組化要多少錢關于免疫組化的常見問題匯總。

英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

7、PBS洗3次，每次5min。

8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

9、PBS洗3次，每次5min。

10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

12、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

醫療和預后有關的免疫組化。與醫療及預后有關的標記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等，卵巢上皮性cancer中P53的過表達與cancer的擴散、分化、術后殘存cancer灶呈正相關;乳腺cancer中表達C-erbB2的浸潤性cancer患者預后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達增高，PTEN基因表達減弱，提示cancer預后不良。(2)細胞增殖性標記物:cancer細胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫療與預后，如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細胞的增生做出評價，表達指數越高，表明其增殖指數越活躍，惡性度增高，預后不良，其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發現Ki-67、EGFR陽性者，淋巴結轉移率高，并與ji素受體的表達呈負相關。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等，應用更為范圍廣的的是子宮內膜cancer及乳腺cancer，如對乳腺cancer中ER、PR的檢測，有助于決定臨床醫療中是否需要加入內分泌ji素阻斷醫療，并能判斷預后，ER及PR陽性表達、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達病例對三苯氧胺等ji素醫療反應良好，而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。哪里可以做免疫組化？

免疫組化的DAB顯色時間如何把握？

1、DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現淺棕色本底時即可沖洗；

2、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；

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3、此外，若很短時間就出現背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；

4、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）；另一方面就是封閉時間過長。 做免疫組化意味什么？山西細胞免疫組化要多久

免疫組化常見問題原因分析！寧夏做得好的免疫組化要多久

免疫組化的質量控制免疫組化的質量控制是確保實驗結果可靠性和重復性的關鍵步驟。質量控制包括實驗前的抗體驗證、實驗中的陽性對照和陰性對照，以及實驗后的結果評估。抗體驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達目標蛋白的組織或細胞，確保實驗系統的有效性。陰性對照是使用不表達目標蛋白的組織或細胞，排除非特異性結合。結果評估是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估，確保實驗結果的可靠性。寧夏做得好的免疫組化要多久