免疫組化的局限性。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標記物必須具有的,但至今所發現的cancer標記物還沒有能完全滿足這些標準。某些正常細胞也分泌一些cancer標記物,因此cancer細胞學并不是單獨產生一種標記物,即選用一組抗體比單一抗體更有利。在cancer診斷中評估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當的陽性與陰性對照,作為技術完整性質量控制,如對照組被忽略或不理想時,免疫組化染色的結果要謹慎對待,免疫組化的正確結果不僅要依靠技術步驟上規范化操作,而且有賴于正確的解釋,在報告免疫組化染色結果時不應孤立地解釋,應考慮到診斷與鑒別診斷、所應用的抗體特性、所研究組織性質,同時還要注意假陽性與假陰性結果的干擾。英瀚斯生物,組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報告分析,一站式搞定!江西小鼠免疫組化價格
免疫組化技術有哪些應用?
定位和定性是免疫組化比較大的優勢。相比于其他蛋白檢測方法,免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高,是定位檢測分析優先方法,尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面:惡性**的診斷與鑒別定性;確定轉移性惡性**的原發部位;對某類**進行進一步的病理分型;軟組織**診斷;為臨床提供治療方案的選擇;近年來,隨著免疫組織化學技術的發展和各種特異性抗體的出現,使許多疑難**得到了明確診斷。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可,其在低分化或未分化**的鑒別診斷時,準確率可達50%-75%。
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醫療和預后有關的免疫組化。與醫療及預后有關的標記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等,卵巢上皮性cancer中P53的過表達與cancer的擴散、分化、術后殘存cancer灶呈正相關;乳腺cancer中表達C-erbB2的浸潤性cancer患者預后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達增高,PTEN基因表達減弱,提示cancer預后不良。(2)細胞增殖性標記物:cancer細胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫療與預后,如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細胞的增生做出評價,表達指數越高,表明其增殖指數越活躍,惡性度增高,預后不良,其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發現Ki-67、EGFR陽性者,淋巴結轉移率高,并與ji素受體的表達呈負相關。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等,應用更為范圍廣的的是子宮內膜cancer及乳腺cancer,如對乳腺cancer中ER、PR的檢測,有助于決定臨床醫療中是否需要加入內分泌ji素阻斷醫療,并能判斷預后,ER及PR陽性表達、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達病例對三苯氧胺等ji素醫療反應良好,而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。
免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫生對其染色結果的判斷,進而影響病理診斷,所以制作一張良好的免疫組化切片至關重要,它需要病理醫生與病理技師兩者間的相互協調,密切配合和共同努力,病理醫生選擇抗體,設置對照,判讀結果,指導技術;而技術人員進行實驗操作,保證染色質量。在免疫組化切片的制作過程存在多個環節,每一環節的失誤都可能影響檢測結果,如抗原保存,蛋白酶消化,增強技術及對抗體的管理、使用和試劑的濃度等等,因此制作一張高質量的免疫組織化學切片是多方面相互配合的結果。英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南!
免疫組化實驗所用的抗體
免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體混合物。
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免疫組化常用的染色方法
根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。 英瀚斯實驗外包,病理染色切片免疫組化,效率高!福建靠譜免疫組化檢測
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免疫組化的實驗步驟
免疫組化的實驗步驟通常包括組織固定、切片、抗原修復、封閉、一抗孵育、二抗孵育、顯色和復染等。首先,組織樣本需要經過固定(如福爾馬林固定)以保持其形態結構。然后,將固定后的組織包埋在石蠟中并切成薄片。抗原修復是為了暴露被固定過程掩蓋的抗原表位,常用的方法有熱修復和酶消化。封閉步驟是為了減少非特異性結合,通常使用血清或BSA。一抗孵育是關鍵步驟,一抗與目標蛋白特異性結合。二抗孵育則是通過二抗與一抗結合,并連接顯色系統。,通過顯色和復染使目標蛋白可視化。 江西小鼠免疫組化價格