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蘇州臻準數字PCR分析應用

來源: 發布時間:2023-02-27

根據泊松分布的定義和適用條件可知,如果我們設微液滴總數為N,投入的靶序列拷貝數為M,那么“每個微液滴中的靶序列拷貝數”的概率分布是近似滿足泊松分布的。理解之前,首先要明確一點,在檢測的過程中,并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點,這個反應當中就有幾個目標基因的拷貝。因為目標基因的片段,在微滴當中的分布,是符合泊松分布的(也就是說進不進的概率相等,并且相互獨立)。所以,一個發光的微滴中,可能有一個或者三個四個,甚至更多個目標基因的拷貝。因此,發光的微滴數與原始的基因拷貝數并不是一對一的對應關系。目前dPCR中體積優化方法以光學顯微鏡觀測為主。蘇州臻準數字PCR分析應用

引物設計(DesignPrimers):引物長度(PrimerLength):18-25個堿基之間。短的引物更易于同靶序列結合,但過短的引物也更可能同基因組上的多個區域相結合而產生非特異性擴增產物。更長的引物會提高同靶序列結合的特異性,但過長的引物(>30bp)同靶序列結合速度變慢,降低結合率。引物長度和組成直接影響引物Tm值(PrimerMeltingTemperature)和退火溫度(AnnealingTemperatures)。引物的組成——GC%含量(GCContent):指引物總堿基中G和C堿基數量的百分比,該值應在40-60%之間。如果模板序列的GC含量較高,推薦使用較高Tm值的引物。廣東銳訊數字PCR儀器dPCR被稱作第三代PCR技術,但dPCR技術的廣泛應用逐漸顯現出一些不足之處。

基于微滴的QX100dPCR儀,利用油包水技術,將樣品平均分配到20000個微滴油包水中,利用微滴分析儀對微滴進行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR儀,在高壓氣體驅動下,將每個標準反應體系分割成包含100萬至1000萬個皮升級別微滴的反應乳液。數字PCR就形成了2大派別,芯片式和微滴式。不論是哪種數字PCR,其原理都是有限稀釋,終點PCR和泊松分布。將含有核酸模板的標準PCR反應體系,平均分配成幾萬個PCR反應,分配到芯片或微滴中,使每個反應中盡可能含有一個模板分子,進行單分子模板PCR反應,通過讀取熒光信號的有或無進行計數,經過統計學泊松分布的校準進行定量。

本次推出的全自動數字PCR一體機可以適用于包括醫療檢測領域在內的多種應用場景。對于可以實現早期篩查、早期診斷、用藥指導以及監測的復發。對于病原體可以實現超多重檢測,以利于快速診斷。在優生優育領域也可以實現更多遺傳性疾病的診斷和檢測。對于臨床應用具有極大的潛力和價值。通過線上+線下的方式舉行了數字PCR2.0技術方案研討會,來自醫療界的**學者共聚一堂,圍繞PCR技術的發展和應用進行交流和討論。歡迎咨詢廣州雙螺旋科學儀器有限公司。數字PCR是直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的定量。

無創產前篩查有望成為數字PCR在臨床快速落地的锏應用。首先,無創產前篩查領域對于兼顧成本、準確性、速度的創新技術的需求還未滿足。其次,無創產前篩查市場空間龐大,雖說中國每年新生兒的增長速度正在放緩,但每年仍有超過1000萬的新生兒,帶來了巨大的想象空間。2022年6月,鄭大一附院遺傳與產前診斷中心、塔歌生物聯合在JournalofTranslationalMedicine(影響因子5.531)雜志上發表文章,驗證了數字PCR作為T21,T18和T13產前篩查方法的可行性,這是世界上報道在真實臨床條件下通過盲檢實現一管反應可從孕婦血漿樣本中同時檢測出T21、T18和T13的數字PCR無創產前篩查試劑盒。文章顯示,塔歌生物胎兒染色體非整倍體無創產前篩查數字PCR試劑盒總體篩查的靈敏度為100%,特異性為95.12%,均優于血清學篩查。除準確率高之外,塔歌生物的產品還擁有成本低、操作簡便,及檢測速度快等優勢,可以加速無創產前篩查在各級醫院,特別是基層地區普遍落地,助力中國出生缺陷防控。在數字PCR賽道,塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無創產前篩查注冊證的申報。一體化數字PCR原理

3D數字PCR是基于納米流體芯片進行檢測,通過一次檢測,將樣品分到數千個單獨的PCR。蘇州臻準數字PCR分析應用

數字PCR產品的發展,為不同場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路,尤其是在醫學檢驗方面,在 性疾病早期檢測、病癥的液體活檢、無創產前檢查等領域展現出良好的應用前景。實現 性疾病早期高效檢測——以病毒為例,有病毒檢測、和臨床樣本病毒載量評估He監測環境病毒載量二代熒光定量PCR檢測技術是目前病毒檢測的"金標準",但由于病毒探針結合位點突變、樣本病毒載量不足等原因,在臨床檢測過程中經常出現假陰性結果,由于數字PCR具有更高的靈敏度、精細度,以及其適合痕量樣本檢測的特性,能夠檢測出熒光定量PCR檢測過程中錯過的 ,可作為后者的補充。在人群篩查及臨床診療中,為科學選取采樣方式,需要評估不同臨床樣本病毒載量,如鼻咽拭子、血尿、糞便、肺泡灌洗液等,由于數字PCR可提供一定程度上量化指標,為采樣方法的選取提供了參考,從而提高檢出率。在外防輸入的戰略要求下,環境病毒檢測工作尤為重要,數字PCR可對低核酸豐度樣本進行有效檢測,包括從不同環境中取樣的樣本,如病房、醫院衛生間、實驗室等等,在病情防控中起到了不可忽視的作用。此外,數字PCR的應用場景還有病程不同階段的病毒載量評估、核酸參考品制備、抗病毒藥物研發等環節。蘇州臻準數字PCR分析應用

廣州雙螺旋科學儀器有限公司屬于精細化學品的高新企業,技術力量雄厚。公司致力于為客戶提供安全、質量有保證的良好產品及服務,是一家有限責任公司(自然)企業。公司始終堅持客戶需求優先的原則,致力于提供高質量的數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀。雙螺旋科學儀器以創造***產品及服務的理念,打造高指標的服務,引導行業的發展。

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