3D數(shù)字PCR為液體活檢提供技術(shù)支持液體活檢是一種非侵入性的檢測基因及臨床效果的一種方法，目前可能正在開展有關(guān)3D數(shù)字PCR在在液體活檢中的療效，為后期臨床提供更多可靠的指導(dǎo)作用。報道稱“無創(chuàng)傷性肺檢測技術(shù)即將登陸中國”。隨著基因檢測技術(shù)，如類似3D數(shù)字PCR技術(shù)的發(fā)展，推動我們將進入了“DNA的應(yīng)用商城”這樣的新時代，如23andme、華大基因等專業(yè)的檢測服務(wù)機構(gòu)，提供更加專業(yè)的基因檢測結(jié)果，經(jīng)基因報告解讀師或遺傳咨詢師進行通俗的解讀，讓我們每一個人都能夠了解自己的基因，擁有自己的“生命之書”，讓我們更加健康的生活。精細醫(yī)療其實本質(zhì)是應(yīng)用生物學(xué)信息與大數(shù)據(jù)科學(xué)的交叉發(fā)展的新型醫(yī)學(xué)概念與醫(yī)療模式。對于精細醫(yī)療，重點在于“精細”，不僅只是簡單的基因測序如此簡單，更需要精細的診斷與精細的。從市場規(guī)模來看，目前數(shù)字PCR市場規(guī)模并不大，全球約1.5億至2.5億美元。美國數(shù)字PCR儀器

根據(jù)泊松分布的定義和適用條件可知，如果我們設(shè)微液滴總數(shù)為N，投入的靶序列拷貝數(shù)為M，那么“每個微液滴中的靶序列拷貝數(shù)”的概率分布是近似滿足泊松分布的。理解之前，首先要明確一點，在檢測的過程中，并不是說一個樣本中檢測到了幾個亮點，這個反應(yīng)當(dāng)中就有幾個目標(biāo)基因的拷貝。因為目標(biāo)基因的片段，在微滴當(dāng)中的分布，是符合泊松分布的（也就是說進不進的概率相等，并且相互獨立）。所以，一個發(fā)光的微滴中，可能有一個或者三個四個，甚至更多個目標(biāo)基因的拷貝。因此，發(fā)光的微滴數(shù)與原始的基因拷貝數(shù)并不是一對一的對應(yīng)關(guān)系。美國數(shù)字PCR儀器臻準(zhǔn)推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。

使用ddPCR的一個主要優(yōu)點在于，定量不是相對的。微滴式數(shù)字PCR計算事件的數(shù)量，因此可以確定檢測極限和比較低起始量，以便達到所需的靈敏度。在連續(xù)監(jiān)控或比較不同患者的效果時，這可以更準(zhǔn)確地比較負荷，因為所測得的豐度不是相對的。經(jīng)過實驗證實，ddPCRKRASG12/G13ScreeningKit也能夠檢測患者cfDNA樣品中的KRAS突變（圖2）。這些患者的血漿樣品購自ConversantBio和ProMedDx，之前已通過FFPE基因分型被分為KRAS突變陽性或陰性。歡迎咨詢廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司。

dPCR在使用過程中需要特別注意體積誤差造成的結(jié)果偏差。體積誤差對于測量拷貝數(shù)濃度會產(chǎn)生偏差。目前dPCR中體積優(yōu)化方法以光學(xué)顯微鏡觀測為主。分散體積的差異會增加拷貝數(shù)結(jié)果的不確定性，Emslie等使用光學(xué)顯微鏡縱向拍照比較圖片邊緣的微小差異，考察了數(shù)字PCR系統(tǒng)中每個微孔內(nèi)和孔與孔間的體積差異對實驗結(jié)果的影響程度。Corbisier等使用微滴數(shù)字PCR對6種不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)棉籽粉質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[ERM-AD623a-f，濃度范圍（10~10）copies/ul]進行分析，優(yōu)化了液滴體積得到相應(yīng)校正因子，并使用該校正因子發(fā)現(xiàn)并校準(zhǔn)了運行軟件中液滴體積不變的假設(shè)而引起的數(shù)據(jù)偏離，數(shù)據(jù)結(jié)果的一致性有明顯提高。數(shù)字PCR應(yīng)用前景廣闊，可用于病原微生物檢測、基因檢測、無創(chuàng)產(chǎn)前篩查、測序結(jié)果驗證等領(lǐng)域。

數(shù)字PCR平臺的評價指標(biāo)有：分割單元數(shù)，熒光通道數(shù)，操作復(fù)雜性和污染風(fēng)險。但是重要的是檢測準(zhǔn)確性，評估數(shù)字PCR平臺的一種方法是使用多個數(shù)字PCR平臺互相驗證，另一種方法是使用定值準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。目前的三代的PCR技術(shù)各有各的優(yōu)缺點，也各有各的應(yīng)用領(lǐng)域，并不是一代取代一代的關(guān)系。技術(shù)的不斷進步給PCR技術(shù)注入了新的活力，使其能解鎖一個又一個的應(yīng)用方向，使核酸檢測更方便、更準(zhǔn)確。目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴，但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進以及使用較便宜的材料，聚合成更小的體積[556]，其價格將會不斷的降低，使其應(yīng)用到更多的檢測中。數(shù)字PCR在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優(yōu)勢。雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR市場前景

數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣，除了可應(yīng)用于進行突變的檢測以外，也可運用于基因擴增的檢測。美國數(shù)字PCR儀器

作為時下的熱點技術(shù)，數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨、平行的微反應(yīng)單元（nL，納升級別）中，使得每個反應(yīng)單元中盡可能含有1個模板分子，并在此基礎(chǔ)上進行擴增、檢測和分布統(tǒng)計，從而實現(xiàn)靶標(biāo)分子的比較 計數(shù)。（圖：數(shù)字PCR技術(shù)原理）根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式，數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等。與一、二代PCR技術(shù)相比，數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標(biāo)；三是微反應(yīng)單元相互獨立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴增產(chǎn)物間的相互干擾，準(zhǔn)確度和可重復(fù)性較高。美國數(shù)字PCR儀器

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