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河南細胞外泌體載藥實驗大概費用

來源: 發(fā)布時間:2022-06-20

外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子,已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,市場已經(jīng)有應(yīng)用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,但是價格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜,之后再低速離心。即可進行外泌體的提取,此方法實行起來較為簡單。外泌體載阿霉素可以部分限制阿霉素穿過心血管內(nèi)皮細胞,減少阿霉素在心臟部位的聚集,降低心臟毒性。河南細胞外泌體載藥實驗大概費用

miRNA的運載也存在著種種挑戰(zhàn):miRNA體內(nèi)穩(wěn)定性差、生物分布不理想、易被體內(nèi)酶降解以及容易引起副反應(yīng)等。越來越多的研究表明外泌體也是體內(nèi)運載miRNA的優(yōu)良載體,并且利用外泌體運輸miRNA的zhiliao方法已經(jīng)在許多疾病模型中得以應(yīng)用。采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞的方法,使外泌體載有anti-miR-9。在進行間充質(zhì)細胞和多形性成角質(zhì)細胞瘤(GBM)細胞間anti-miR-9傳遞的實驗時,發(fā)現(xiàn)兩種細胞不jin可以通過縫隙連接介導(dǎo)的細胞間通訊(GJIC)也可以通過外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細胞(U87和T98G)對中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實現(xiàn),而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9,顯示出外泌體在運載miRNA進行基因zhiliao時的潛力。組織外泌體載藥實驗服務(wù)外泌體載yao方法-共孵育方法適用于親脂類藥物。

姜黃素/外泌體可以明顯地減少由脂多糖引起的炎癥因子IL-6(白介素-6)和TNF-a(中流壞死因子-α)的釋放。在脂多糖引起的炎癥模型中,注射姜黃素/外泌體的小鼠組幾乎未發(fā)生死亡,而注射游離姜黃素藥物的小鼠組死亡率接近60%,注射姜黃素/脂質(zhì)體的小鼠組死亡率接近80%。這說明姜黃素/外泌體對脂多糖引起的感ran性休克有較好的zhiliao效果,從而提高了C57BL/6J模型鼠的存活率。研究者認為,將外泌體作為姜黃素的載體時,可以增加Gr-1+細胞對姜黃素的攝取,從而句有更好的kang炎作用。

mRNA也可以作為“貨物”被外泌體運輸。利用多泡體(含外泌體)負載mRNA/蛋白進行中流zhiliao的研究。研究者們利用脂質(zhì)體2000或病毒載體對HEK-293細胞進行轉(zhuǎn)染,使其分泌的多泡體含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP,其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPRT:尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶;EGFP:增強型綠色熒光蛋白)。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處,并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC),神經(jīng)鞘瘤的增長被明顯抑制。這主要是由于CD和UPRT可以將5-FC轉(zhuǎn)化為5氟尿嘧啶脫氧核苷酸(5-FdUMP),而后者又是胸甘酸合成酶的抑制劑,可以抑制脫氧胸甘酸的合成,從而起到抑制DNA的合成以及促進中流細胞凋亡的效果。Saydam等的研究表明多泡體/外泌體不jin可以有效輸送mRNA/蛋白質(zhì),并且句有與其他抗ai藥物聯(lián)合zhiliao中流的潛力。相同劑量的PTX,PTX-M1-Exos載藥體系和游離的PTX相比,對小鼠乳腺ai4T1的抑制率更高。

外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——梯度密度離心法。外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬。裝載連翹苷(phil)的MHS來源外泌體具有完整茶托狀膜結(jié)構(gòu)的類圓形。安徽組織外泌體載藥

姜黃素裝載在牛奶來源的外泌體經(jīng)口服方式可以有效地調(diào)控靶細胞。河南細胞外泌體載藥實驗大概費用

外泌體載帶蛋白質(zhì)藥物的方法包括直接和間接兩種載yao方式。間接載yao方式是目前實現(xiàn)外泌體載帶目標(biāo)蛋白質(zhì)的主要方法,通過基因工程使目標(biāo)蛋白質(zhì)核酸轉(zhuǎn)染供體細胞,待供體細胞表達目標(biāo)蛋白質(zhì)后,分離純化其培養(yǎng)基,得到載帶有目標(biāo)蛋白質(zhì)的外泌體遞送系統(tǒng)。主要缺點是載藥周期長、載藥量和載藥過程不可控,在一定程度上限制該方法在構(gòu)建外泌體遞送系統(tǒng)上的應(yīng)用;直接載yao方式是指不涉及外泌體供體細胞,直接通過某種化學(xué)或物理作用將外源性蛋白質(zhì)載入外泌體中的方法。因周期短、操作簡單、過程可控等優(yōu)點,成為一種極句前景的研究方法。河南細胞外泌體載藥實驗大概費用

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