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浙江動物組織樣本外泌體載藥實驗咨詢問價

來源: 發布時間:2022-11-02

外泌體直接載yao方式包括皂苷處理法、孵育法、凍融循環法、超聲法和擠出法等。皂苷處理法指共培養外泌體、藥物和皂苷溶液,然后通過透析膜、色譜柱純化得到載藥外泌體的方法。孵育法指藥物和外泌體在適宜的條件下共培養。凍融循環法是經過冷凍、融化過程使外泌體包裹藥物。超聲法利用超聲波使藥物進入外泌體中,擠出法利用擠出機實現外泌體載帶藥物。其中皂苷輔助藥物裝載方法是直接載yao方式中常用的一種載yao方式。上述方法也存在一些缺點:孵育法操作簡單,但載藥量低;凍融循環法、超聲法和擠出法對儀器的要求高,且可能會破壞外泌體的質膜結構造成藥物泄露,終造成載藥量不理想。研究表明外泌體具有攜帶藥物透過BBB靶向膠質瘤并抑制中流生長的能力。浙江動物組織樣本外泌體載藥實驗咨詢問價

外泌體載藥系統的性質評估:1對外泌體進行一般性質評估的方法已有多種,包括納米顆粒跟蹤分析技術(NTA)、動態光散射(DLS)、流式細胞術、原子力顯微技術(AFM)、透射電子顯微鏡(TEM)、掃描電子顯微鏡(SEM)等。2細胞實驗:將載藥外泌體添加到相應的細胞培養基,通過培養觀察、檢測表達物或統計細胞凋亡率來驗證載藥外泌體與靶細胞的親和力、藥理作用并分析其作用機制。3動物實驗:不jin可驗證載藥外泌體的體內藥理作用,還可研究其全部或部分藥動學參數。與細胞實驗比較,動物實驗考慮內環境、體溫、免疫qing除等各種因素對載藥外泌體的影響,同時還考慮個體差異的影響,從而得出更句臨床意義的結論。北京細胞外泌體載藥負載姜黃素的外泌體可經外泌體轉運通過血腦屏障, 運送到腦組織中, 減輕氧化應激,維持腦血管屏障功能。

研究證明了外泌體運載siRNA進行RNAizhiliao的潛力。在他們的研究中,首先通過化學轉染法將RAD51siRNA裝載入源于HeLa細胞和腹水的外泌體,隨后在體外成功地將siRNA運輸至目標細胞。結果顯示,這種外泌體負載RAD51siRNA的抑制效果與直接化學轉染目標細胞的抑制效果相當,但由于化學轉染外泌體后不能將外泌體和轉染劑很好的分離,在應用外泌體時,無法說明是外泌體還是轉染劑在發揮作用。于是研究者又利用電穿孔使RAD51siRNA載入到外泌體中。結果顯示,相比于外泌體與siRNA的混合物(未經載藥處理),經電穿孔載siRNA后的外泌體可以有效抑制RAD51。并且由于RAD51的抑制會帶來人ai細胞的大量死亡,因而通過外泌體運載siRNA的方法在ai癥zhiliao方面有著誘人的前景。

電穿孔法時外泌體載藥的方法的一種,因參數容易控制,多種藥物載入外泌體都可以使用該方法。Wang等人研究了胞外囊泡作為小RNA的靶向遞送系統,利用電穿孔法將siRNA/microRNA載入核酸適配體AS1411(AS1411是一種靶向中流細胞高表達核仁素的核酸適配體)修飾的囊泡中,然后通過外泌體將siRNA/microRNA靶向遞送到乳腺ai組織。由于AS1411和核仁素的的結合達到瘤靶向(核仁素在乳腺ai細胞表面高表達),這種靶向let-7miRNA的囊泡可在體外傳遞到人乳腺aiMDA-MB-231細胞。靜脈注射載有Cy5熒光標記的miRNAlet-7的AS1411囊泡,可以選擇性靶向荷瘤小鼠中的中流部位,并抑制中流的生長,而且修飾的囊泡耐受性良好,沒有顯示明顯的非特異性副作用或免疫應答反應。將藥物載入外泌體的方法主要有兩種:前轉載和后轉載。

有研究發現,在外泌體載藥系統中,對外泌體的產生環境進行干擾(如,缺氧)能夠改變外泌體的分泌組分。Zhu等人研究了缺氧處理的間充質干細胞(MSCs)來源外泌體(ExoH)在心肌修復方面是否優于其在常氧條件下產生的外泌體(ExoN)。在小鼠心肌梗死實驗中,ExoH處理的小鼠具有更高的生存率、更小的疤和更好的心臟功能恢復。進一步研究發現,相比于ExoN,ExoH具有更高表達水平的miR-210以及對外泌體分泌至關重要的中性鞘磷脂酶2(nSMase2)的表達。類似地,Zhu等人發現缺氧條件下MSC-Exo遞送的miR125b-5p能夠通過改善心肌細胞凋亡來促進缺血性心臟修復。此外,他們還將ExoH與缺血心肌靶向肽綴合,構建了一種新型的藥物遞送載體,增強了缺血性疾病的藥物遞送特異性。間充質干細胞外泌體既有作為載藥載體的特性,還有MSC的多種生物學功能,本身也可以作為“藥物”使用。樣本外泌體載藥實驗咨詢問價

外泌體可以通過細胞內吞的方式將紫杉醇釋放到受體細胞中,提高藥物對供體中流細胞的毒性。浙江動物組織樣本外泌體載藥實驗咨詢問價

外泌體的提取方法在外泌體載藥系統中應用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子,已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,市場已經有應用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,但是價格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細胞培養液4℃孵育過夜,之后再低速離心。即可進行外泌體的提取,此方法實行起來較為簡單。浙江動物組織樣本外泌體載藥實驗咨詢問價

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