Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻(xiàn)中介紹，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進(jìn)一步純化胎盤相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀。經(jīng)過多次實驗反復(fù)驗證，確定同時表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。干細(xì)胞外泌體具有減少細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管生成等功能。江西細(xì)胞上清外泌體染色

    Caveolin-1(cav1)是稱為細(xì)胞膜穴樣內(nèi)陷的質(zhì)膜內(nèi)陷的重要結(jié)構(gòu)和信號成分，在脂肪細(xì)胞中含量豐富。正如之前報道的那樣，cav1基因（ad-cav1敲除[KO]小鼠）的脂肪細(xì)胞特異性消融不會導(dǎo)致蛋白質(zhì)的消除，因為cav1蛋白質(zhì)從鄰近的內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移到脂肪細(xì)胞。然而，這是小鼠功能性KO，因為脂肪細(xì)胞小窩結(jié)構(gòu)已耗盡。與對照組相比，盡管葡萄糖刺激的胰島素分泌完全喪失、代謝組織中胰島素刺激的AKT激huo減弱以及部分脂肪代謝障礙，但采用高脂肪飲食(HFD)的ad-cav1KO小鼠顯示出全身葡萄糖清chu率有所改善。原因是白色脂肪組織(AT)增加了不依賴胰島素的葡萄糖攝取和減少了肝糖異生。此外，HFD喂養(yǎng)的ad-cav1KO小鼠表現(xiàn)出明顯的AT炎癥、纖維化、線粒體功能障礙和脂質(zhì)代謝失調(diào)。ad-cav1KO小鼠的葡萄糖清chu表型至少部分由AT外泌體(AT-sEV)介導(dǎo)。向?qū)φ招∈笞⑸鋪碜詀d-cav1KO小鼠的AT-sEV表型復(fù)制ad-cav1KO特征。有趣的是，來自ad-cav1KO小鼠的AT-sEV將AT的表型傳播到肝臟。這些數(shù)據(jù)表明，ad-cav1對于AT健康適應(yīng)營養(yǎng)過剩至關(guān)重要，并防止外泌體將負(fù)性表型異常傳播到其他organ。 湖北干細(xì)胞外泌體外泌體內(nèi)的miRNA、lncRNA和cirRNA表達(dá)低，檢測難度大。

在Cancer Immunol Res雜志上的一篇文章，外泌體療法是否可以在檢查點難治性B16黑色素瘤模型中誘導(dǎo)對抗PD-1或PD-L1療法的敏感性研究發(fā)現(xiàn)。注射樹突狀細(xì)胞(DC)衍生的EV，而不是檢查點阻斷，可誘導(dǎo)有效的抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)并減少荷瘤小鼠的腫瘤生長。在診治模型中，EV和抗PD-1或PD-L1的聯(lián)合療法增強(qiáng)了對裝載OVA和α-半乳糖神經(jīng)酰胺的EV的免疫反應(yīng)。此外，聯(lián)合診治導(dǎo)致預(yù)防性tumour模型的存活率增加。這表明EV可以在檢查點難治性CA中誘導(dǎo)有效的抗腫瘤免疫反應(yīng)，并在先前無反應(yīng)的tumour模型中誘導(dǎo)抗PD-1或抗PD-L1反應(yīng)。

    細(xì)胞衍生的小細(xì)胞外囊泡(sEV)具有抗ai作用。然而，應(yīng)加強(qiáng)它們的抗ai潛力以提高臨床適用性。在此，我們從通過柔性接頭在質(zhì)膜上表達(dá)IL2的工程化JurkatT細(xì)胞生成了IL2-tetheredsEVs(IL2-sEVs)，以誘導(dǎo)自分泌效應(yīng)。IL2-sEVs在不影響調(diào)節(jié)性T(Treg)細(xì)胞的情況下增加CD8+T細(xì)胞的抗ai能力，并下調(diào)黑色素瘤細(xì)胞中的細(xì)胞和外泌體PD-L1表達(dá)，導(dǎo)致它們對CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性的敏感性增加.它對CD8+T細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞的作用是由幾種IL2-sEV駐留microRNAs(miRNAs)介導(dǎo)的，它們的表達(dá)被IL2的自分泌作用上調(diào)。在miRNA中，miR-181a-3p和miR-223-3p顯著降低了黑色素瘤細(xì)胞中的PD-L1蛋白水平。有趣的是，miR-181a-3p在抑制Treg細(xì)胞活性的同時增加了CD8+T細(xì)胞的活性。IL2-sEVs抑制攜帶黑色素瘤的免疫活性小鼠的腫瘤進(jìn)展，但不抑制免疫缺陷小鼠的腫瘤進(jìn)展。IL2-sEVs與現(xiàn)有抗ai藥物的組合通過降低體內(nèi)PD-L1表達(dá)顯著提高了抗ai療效。因此，IL2-sEVs是潛在的CA免疫診治劑，可通過重新編程miRNA水平來調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞和ai細(xì)胞。 循環(huán)外泌體lncRNA-GC1有作為早期檢測胃ai進(jìn)展的診斷價值。

    細(xì)胞外囊泡(EV)在臨床診治診斷學(xué)中有多種應(yīng)用。然而，目前分離等離子EV的技術(shù)存在繁瑣的程序和有限的產(chǎn)量。在此，我們報告了一種快速高效的EV分離平臺，即EV-FISHER，它由具有可裂解脂質(zhì)探針（PO43--spacer-DNA-cholesterol，PSDC）的金屬有機(jī)框架構(gòu)成。EV-FISHER通過膽固醇從血漿中誘捕EV，并用普通離心機(jī)將它們分離。捕獲的EV可以在隨后被脫氧核糖核酸酶I切割PSDC時釋放和收集。我們得出結(jié)論，EV-FISHER在時間（-0分鐘對240分鐘）、分離效率（對)，以及分離要求（12,800g對135,000g）方面具有優(yōu)勢。除了在血漿中的穩(wěn)定性外，EV-FISHER還表現(xiàn)出與下游單EV流式細(xì)胞儀的良好兼容性，能夠鑒定glypican-1(GPC-1)EVs用于早期診斷、臨床分期和療效評估。這項工作描繪了一種有效的策略，可以將EV從復(fù)雜的生物流體中分離出來，具有促進(jìn)基于EV的診治診斷學(xué)的潛力。 外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合。江西細(xì)胞上清外泌體染色

中流外泌體內(nèi)的lncRNA分子在一些中流相關(guān)疾病中具有重要的診斷應(yīng)用價值。江西細(xì)胞上清外泌體染色

    轉(zhuǎn)基因CD47過表達(dá)是改善異種移植物排斥反應(yīng)和對多能干細(xì)胞的同種異體反應(yīng)的一種令人鼓舞的方法，其功效與CD47表達(dá)水平相關(guān)。然而，CD47在連接后也會傳遞導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙或死亡的信號，這引起了人們對過度表達(dá)CD47可能有害的擔(dān)憂。在這里，我們公布了細(xì)胞表面CD47的替代來源。我們表明，從過表達(dá)CD47（轉(zhuǎn)基因或天然）的正常或腫瘤細(xì)胞中釋放的細(xì)胞外囊泡，包括外泌體，可以在豬或人類細(xì)胞上誘導(dǎo)有效的CD47改變。與自體CD47一樣，細(xì)胞表面的CD47能夠與SIRPα相互作用以抑制吞噬作用。然而，自體而非改變的CD47誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。因此，CD47改變提供了細(xì)胞表面CD47的替代來源，可以在不向細(xì)胞傳遞有害信號的情況下引發(fā)其抗吞噬功能。CD47變化也表明了一種先前未發(fā)現(xiàn)的Tumour誘導(dǎo)免疫抑制機(jī)制。我們的研究結(jié)果應(yīng)該有助于進(jìn)一步優(yōu)化CD47轉(zhuǎn)基因方法，該方法可以通過比較大限度地減少CD47過表達(dá)的有害影響來改善結(jié)果。 江西細(xì)胞上清外泌體染色

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