外泌體中這些物質的結構與它們在分泌細胞內的結構不同,所以可能存在一種外泌體特異蛋白和mRNA/miRNA在外泌體內選擇性積累的機制。這種特異性可將外泌體內的RNA作為生物標記,更進一步作為醫治開發方法的靶點。外泌體中的mRNA一旦被靶細胞吞噬,能夠引起這個細胞內的功能性蛋白的表達,但外泌體中多數的miRNA是前體而非功能性miRNA,這些miRNA起著何種生理性意義,學者們正在研究。由于外泌體含有各種蛋白質、RNA和脂質,研究人員正將其進行細胞分類,建立數據庫(ExoCarta)。此外,在世界各地分別進行著運用蛋白質組學、轉錄組學和系統生物學的大規模分析工作,而FunRich的EV plugin作為一種通用的分析手段已被公布出來。今后,在推進外泌體研究方面,各領域的研究人員信息共享至關重要。外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml。干細胞外泌體label free
當外泌體在1980年初次被發現后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、種瘤侵襲等方方面面。有研究表明種瘤來源的外泌體參與到種瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了種瘤的生長與侵襲。浙江植物外泌體外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質。
為了解決外泌體實驗遇到的上述的各種問題, Wako 研發出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture? Exosome Isolation Kit PS)提取高純度細胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細胞源的蛋白和脂質,眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細胞通過翻轉酶作用導向細胞膜內側,暴露在外泌體膜外側3)。另外,T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4(Tim4 通過巨噬細胞進行細胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過細胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結合4)?;谏鲜鲋R,我們利用Tim4固化磁珠,在鈣離子存在下捕捉培養上清和血清等樣品中的外泌體,再添加螯合劑洗脫外泌體,這種外泌體純化方法是和金澤大學醫學系免疫學華山教授共同開發,并取得了成功。5)這是迄今為止取代黃金標準超速離心法的新型外泌體純化方法。
細胞分泌到細胞外環境中分別稱為外泌體和微泡的細胞外膜泡是內源性和質膜起源的不同類型的膜囊泡。這些細胞外囊泡(EVs)表示了細胞間通訊的一個重要模式,作為膜和細胞溶質蛋白、脂質和RNA細胞之間傳遞的載體。然而,我們對于EV形成的分子機制知識的缺乏以及缺乏干擾貨物包裝或囊泡釋放的方法仍然妨礙了其在體內生理相關性的探索。這篇綜述專注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的機制。該綜述描述了將外泌體定義為特定的分泌囊泡群體的物理性質,總結了其生物學效應,特別是免疫系統,討論了分泌囊泡可能作為細胞間信使的潛在作用。外泌體是內源性和質膜起源的不同類型的膜囊泡。
l 親脂染料標記外泌體:目前已發表的外泌體文章中,外泌體大多使用親脂性染料進行標記,體內和體外都有較多應用。親脂性染料主要分為兩大類,一類是PKH67(綠色熒光)/PKH26(紅色熒光),由于它們可以與外泌體的脂質雙層膜穩定結合,所以染色效果較好,應用較普遍。第二類是Di系列的親脂性染料,包括DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光)。其中DiR的紅外熒光可穿透細胞和組織,在活成像中用來示蹤。高濃度集聚誘導細胞死亡的TNF-α,可使類風濕關節炎惡化。江蘇組織外泌體提取
外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類。干細胞外泌體label free
除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63, CD81 和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(DH, 烯醇化酶 1, 醛縮酶 1, PKM2, PGK1, PDIA3, GSTP1,DPP4, AHCY, TPL1, 抗氧化蛋白, P4HB, LDH, 親環素 A,FASN, MDH1 和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子, ARF1, CDC42, 人類紅細胞膜整合蛋白, SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。干細胞外泌體label free