外泌體的提取方法在外泌體載藥系統中應用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子,已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,市場已經有應用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,但是價格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細胞培養液4℃孵育過夜,之后再低速離心。即可進行外泌體的提取,此方法實行起來較為簡單。外泌體載阿霉素可以部分限制阿霉素穿過...
外泌體載藥系統的優勢:1首先,外泌體天然的生物學起源為細胞內源性zhiliao因子的產生和裝載提供了特有的機會。此時,zhiliao藥物、寡核苷酸和納米粒子等可被送入細胞,隨后重新包裝成分泌的囊泡。利用細胞產生、裝載和分泌釋放載藥外泌體使zhiliao藥物裝載過程得到簡化,為特定位點(如內腔和囊泡膜)的藥物裝載提供了基礎,并且還使不易裝載的物質句有更高的吸收效率和傳遞效率。2其次,外泌體可穿透某些生物屏障如血腦屏障,到達zhiliao靶點進行給藥。3體內某些外泌體句有很強的穩定性,可避免被巨噬細胞吞噬和溶酶體所降解,為體內外泌體載藥系統的長時間循環和長時間暴露于炎癥等刺激環境時提供保護。外泌體...
phil作為連翹的主要藥效成分之一,具有廣fan藥理作用,但極性較小、滲透性差、體內吸收較差、代謝較快,phil可促進肺中流組織中endostatin的表達,下調血管內皮生長因子(VEGF)表達,共同抑制中流xue管的生成。以磷脂和膽固醇為載體將phil制備成脂質體納米粒,增強了phil的抗氧化活性,緩釋性增強;采用聚山梨酯-80將揮發油和phil制成納米膠束,提高了phil的溶解度,增強了phil的透皮吸收。用外泌體作為藥物載體,制備一種負載連翹苷的外泌體遞藥系統(phil-exo)。制備的phil-exo被A549細胞攝取良好,對A549細胞遷移具有較高抑制作用,明顯提高phil的抗中流細...
天然來源的外泌體含有眾多內源性脂質、蛋白及核酸類物質,其自身句有一定的成藥潛力,例如間充質干細胞來源的外泌體在組織修復領域獲得了巨大成功。當外泌體用作遞送載體時,一般還需人為裝載藥物。理想的載yao方法不jin要實現較高的載藥效率,還應保留外泌體和藥物的功能和完整性。目前,在不破壞外泌體膜完整性的情況下將藥物有效載入到外泌體中仍是一個巨大挑戰。現有的載yao方法可分為分泌前載藥法和分泌后載藥法。分泌前載藥法通常將親代細胞與藥物共孵育(一般需要加轉染試劑),使藥物進入細胞質,細胞質中的藥物通過主動或被動的方式被分選到外泌體中,然后通過合適的提取方法即可獲得載藥的外泌體。分泌后載yao方法是目前常...
疏水性的小分子藥物如紫杉醇、紫衫酚、阿霉素(DOX)、姜黃素等可以通過與分離純化的外泌體共孵育,將藥物負載到外泌體中。這種方法的載藥量往往較低,通過高效液相色譜檢測紫衫醇的載藥量一般為7.2%,DOX的載藥量一般為11.2%。為了達到高效負載藥物的目的,研究人員采用了電穿孔、擠出、輔助超聲、低滲透析等一系列載yao方式將疏水性卟啉化合物載入到外泌體中。研究結果顯示,電穿孔法、擠出、超聲、低滲透析等一系列載yao方式都可以提高卟啉化合物的載藥量。尤其是超聲和低滲透析方法可以提高卟啉化合物的載藥量到11倍。藥物載入到外泌體中的方式可分為兩種,即外源性載yao方式和內源性載yao方式。天津細胞外泌體...
中流細胞的異常增殖和高遷移水平是惡性中流細胞發生轉移的重要特征。通過實驗可以用含藥外泌體DATS-Exo、空白外泌體Exo和DATS處理B16BL6細胞24h后,然后采用MTT的方法檢測細胞的增殖活性。實驗結果顯示,DATS-Exo與DATS都能夠有效抑制B16BL6細胞的增殖,且與DATS組相比,DATS-Exo的抑制作用更強。通過經典的劃痕法考察含藥外泌體DATS-Exo的抑制中流細胞水平遷移能力,DATS-Exo組與DATS組相比具有更強的抑制效果。實驗結果表明,將大蒜素DATS制備成外泌體載藥系統是可以明顯提高其體外抗中流細胞轉移的能力。樹突細胞分泌的外泌體表面會表達出CD9,有利于加...
電穿孔法時外泌體載藥的方法的一種,因參數容易控制,多種藥物載入外泌體都可以使用該方法。Wang等人研究了胞外囊泡作為小RNA的靶向遞送系統,利用電穿孔法將siRNA/microRNA載入核酸適配體AS1411(AS1411是一種靶向中流細胞高表達核仁素的核酸適配體)修飾的囊泡中,然后通過外泌體將siRNA/microRNA靶向遞送到乳腺ai組織。由于AS1411和核仁素的的結合達到瘤靶向(核仁素在乳腺ai細胞表面高表達),這種靶向let-7miRNA的囊泡可在體外傳遞到人乳腺aiMDA-MB-231細胞。靜脈注射載有Cy5熒光標記的miRNAlet-7的AS1411囊泡,可以選擇性靶向荷瘤小鼠...
外泌體作為納米級內源性載體囊泡,具有低免疫原性,可以利用天然獨特的來源透過細胞屏障;為球形空心結構,不需要設計結構而裝載藥物;為細胞間通信介質而用于遞送藥物;對外泌體修飾可獲得靶向性,提高藥物遞送的效率。但外泌體產量一直比較低,已有研究基于Fe2O3與聚乳酸?乙醇酸共聚物的生物可降解納米顆粒(NPs)提高外泌體產量,用LPS刺激THP-1巨噬細胞也會增加外泌體產量。由于外泌體的得率較低,載藥時應考慮藥物性質選擇合適的載yao方法,以達到外泌體的合理運用。外泌體具有透過血腦屏障的能力,包載藥物的外泌體可通過鼻腔給藥的方式到達腦實質zhiliao腦部疾病。福建整體實驗外泌體載藥實驗價格比較電穿孔法...
近年來,藥物載體層出不窮,基于脂質體的載體和基于聚合物的載體是目前廣fan研究的2類藥物載體,然而一般的納米載體在體內循環時易被肝和脾網狀內皮系統巨噬細胞吞噬,且血液中循環時間短,穩定性差,靶向性低。然而,外泌體作為來源于細胞的納米級囊泡狀結構,句有天然的生物學起源和復雜性,在細胞間信息交流的過程中起著重要作用,并且它在人體內分布廣fan,可穿過細胞膜,不易引起免疫反應,作為藥物載體句有獨特優勢,為基因、抗中流等藥物的輸運開辟了一條新的道路。裝載紫杉醇的外泌體靶向給藥系統通過微流控技術純化后可用于抗中流zhiliao。河南整體項目外泌體載藥參考價格通心絡膠囊是心腦血管病常用藥, 句有yi氣活x...
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統中應用——聚合物沉淀法。用于分離病毒和其他的生物大分子,已有50多年歷史,近幾年,將其作為一種新的方法來分離外泌體。目前,市場已經有應用聚乙二醇(polyeth yleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器,但是價格昂貴。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細胞培養液4℃孵育過夜,之后再低速離心。即可進行外泌體的提取,此方法實行起來較為簡單。相同劑量的PTX,PTX-M1-Ex...
姜黃素/外泌體可以明顯地減少由脂多糖引起的炎癥因子IL-6(白介素-6)和TNF-a(中流壞死因子-α)的釋放。在脂多糖引起的炎癥模型中,注射姜黃素/外泌體的小鼠組幾乎未發生死亡,而注射游離姜黃素藥物的小鼠組死亡率接近60%,注射姜黃素/脂質體的小鼠組死亡率接近80%。這說明姜黃素/外泌體對脂多糖引起的感ran性休克有較好的zhiliao效果,從而提高了C57BL/6J模型鼠的存活率。研究者認為,將外泌體作為姜黃素的載體時,可以增加Gr-1+細胞對姜黃素的攝取,從而句有更好的kang炎作用。小分子抗ai藥物DOX裝載于HEK293T細胞來源外泌體內可用于EL4小鼠淋巴瘤模型的抗ai研究。湖南動...
甲狀腺ai(thyroidcarcinoma)是一種常見的內分泌惡性中流。在甲狀腺ai的所有亞型中,甲狀腺未分化ai(ATC)的惡性程度很高。目前ATC缺乏有效的zhiliao藥物,屬于難治性惡性中流疾病,傳統的放化療療效差,分子靶向藥物jin對部分基因突變型ATC有效。硬脂酞輔酶A去飽和酶1(stearoyl-CoAdesat urase1,SCD1)是一種脂肪酸合成和代謝的關鍵調節分子,也是催化飽和脂肪酸向單不飽和脂肪酸轉變的限速酶,參與細胞增殖、細胞凋亡等多種生理過程。為研究SCD1與ATC的關系,通過構建鑒定靶向SCD-1的小干擾RNA(siRNA)外泌體,分析以外泌體為載體的靶向SC...
采用外泌體作為藥物載體,制備一種裝載連翹酯苷A(FTA)的外泌體遞藥系統。細胞攝取實驗的結果表明,A549細胞可以攝取FTA-Exos,并且能維持長時間的穩定,延長了半衰期,明顯的提高了連翹酯苷A的生物利用度,為研究連翹酯苷A體外抗中流轉移作用打下基礎。經典劃痕實驗結果表明,FTA-Exos組對于A549細胞的遷移抑制率高達90%以上,明顯高于連翹酯苷A組遷移抑制率,證實含藥外泌體具有更好的體外抑制A549細胞遷移效果。成功建立了FTA-Exos藥物遞送系統,制備的FTA-Exos性質穩定優越,明顯提高連翹酯苷A的生物利用度,并具有更好的抑制A549細胞遷移作用。外泌體外源性載yao方式是將外...
在藥物遞送系統中,理想的載體應該是安全、有效,并且有很好的生物利用度。同時,載體的穩定性,低的細胞毒性和免疫原性,以及能否成功地將藥物運送到特定的組織或細胞也是至關重要的。外泌體作為藥物遞送系統具有一系列的優點:(1)從患者的組織或血液收集(如骨髓、單核細胞或巨噬細胞)的外泌體,載藥后可以逃避單核吞噬細胞系統(MPS)的qing除,從而減少藥物的qing除率。(2)外泌體具有潛在的靶向性,可以增加藥物輸送到靶組織的能力[10]。(3)外泌體膜的特定脂質體和蛋白質,使得外泌體可以直接與靶細胞膜融合,從而明顯提高藥物進入細胞的可能性。(4)外泌體載體可以避開內吞途徑的內化,而且外泌體的安全性在許多...
phil作為連翹的主要藥效成分之一,具有廣fan藥理作用,但極性較小、滲透性差、體內吸收較差、代謝較快,phil可促進肺中流組織中endostatin的表達,下調血管內皮生長因子(VEGF)表達,共同抑制中流xue管的生成。以磷脂和膽固醇為載體將phil制備成脂質體納米粒,增強了phil的抗氧化活性,緩釋性增強;采用聚山梨酯-80將揮發油和phil制成納米膠束,提高了phil的溶解度,增強了phil的透皮吸收。用外泌體作為藥物載體,制備一種負載連翹苷的外泌體遞藥系統(phil-exo)。制備的phil-exo被A549細胞攝取良好,對A549細胞遷移具有較高抑制作用,明顯提高phil的抗中流細...
外泌體載藥系統一直是眾多研究者關注的焦點。外泌體作為細胞-細胞間交流的“運載工句”,外泌體在正常及疾病下都發揮著不可忽視的功能。利用抗ai癥藥物進行中流zhiliao是抑制中流的一個重要方法,目前抗ai癥藥物的運載存在著種種挑戰,主要體現在:(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體qing除,體內循環的半衰期很短等。采用外泌體運輸抗ai癥藥物,可以提高藥物體系的水溶性,降低藥物對人體的毒性以及避免被網狀內皮系統捕捉從而延長其循環時間。載帶茚地那韋的外泌體給藥系統用于ai滋病相關神經系統疾病的zhiliao。甘肅超聲外泌體載藥研究證明了外泌體運載siRNA...
研究證明了外泌體運載siRNA進行RNAizhiliao的潛力。在他們的研究中,首先通過化學轉染法將RAD51siRNA裝載入源于HeLa細胞和腹水的外泌體,隨后在體外成功地將siRNA運輸至目標細胞。結果顯示,這種外泌體負載RAD51siRNA的抑制效果與直接化學轉染目標細胞的抑制效果相當,但由于化學轉染外泌體后不能將外泌體和轉染劑很好的分離,在應用外泌體時,無法說明是外泌體還是轉染劑在發揮作用。于是研究者又利用電穿孔使RAD51siRNA載入到外泌體中。結果顯示,相比于外泌體與siRNA的混合物(未經載藥處理),經電穿孔載siRNA后的外泌體可以有效抑制RAD51。并且由于RAD51的抑制...
外泌體載yao方法已在多種研究中得到應用,但各自有一定的局限性:共孵育依賴藥物跨膜運輸而包載;超聲法和電穿孔法較為常用,但都破壞了外泌體的膜結構而使藥物進入外泌體,與參數有較大關系;擠壓法依賴儀器的機械力,但機械力是否對外泌體產生影響未知;反復凍融法載藥能力較差;對外泌體修飾可以達到提高細胞攝取或者靶向而改善藥物的療效;藥物混合物中加入皂苷會有體內溶血的潛在風險。目前研究者應用較多的方法是共孵育結合超聲、超聲、電穿孔、修飾外泌體。在中風大鼠中,裝載豐富miR-133b的間充質干細胞外泌體能促進星形膠質細胞釋放外泌體。河北動物血液樣本外泌體載藥實驗參考價格小分子siRNA、miRNA常作為基因z...
1. 外泌體作為粒徑納米級的天然囊泡具有介導細胞間信號轉導、抗原呈遞和免疫應答等功能。此外,外泌體還兼具人工合成囊泡的小粒徑、脂溶、穩定、高滲透性和可改造性等特點,通過共孵育等主動載yao方式和超聲法等被動載yao方式可實現外泌體載藥。母乳中富含外泌體,可促進細胞增殖和遷移,減輕炎癥,對新生兒相關疾病 ( 腸炎、過敏、感ran等) 具有保護潛能。通過對母乳外泌體進行表面分子修飾和內容物深度改造后,有望為新生兒疾病提供更加高效、穩定的zhiliao手段。載帶茚地那韋的外泌體給藥系統用于ai滋病相關神經系統疾病的zhiliao。組織樣本外泌體載藥實驗價格比較外泌體的提取方法在外泌體載藥系統中應用—...
利用外泌體進行體內藥物遞送時必須考慮以下因素:①外泌體和細胞之間相互作用的模式是否與所遞送的zhiliao劑作用機制一致,是否會對所遞送的zhiliao劑功效有所影響;②外泌體廣fan參與了機體的生物過程,大量的外源性外泌體的存在可能會破壞內源性外泌體介導的細胞間通訊;③一些尚不明了甚至未知的機制可能會導致不良副作用,如外泌體表面蛋白質的脫靶信號轉導,還有其他如ai基因和病毒miRNA,或朊病毒顆粒以及外泌體純化過程中未能去除的可溶性顆粒因子等物質在外泌體中一起遞送,均有可能產生不良副作用。提示純化方案中采用嚴格的質控與安全性分析使這些復雜的影響因素小化,對體內和體外研究至關重要。外泌體可以包...
外泌體直接載yao方式包括皂苷處理法、孵育法、凍融循環法、超聲法和擠出法等。皂苷處理法指共培養外泌體、藥物和皂苷溶液,然后通過透析膜、色譜柱純化得到載藥外泌體的方法。孵育法指藥物和外泌體在適宜的條件下共培養。凍融循環法是經過冷凍、融化過程使外泌體包裹藥物。超聲法利用超聲波使藥物進入外泌體中,擠出法利用擠出機實現外泌體載帶藥物。其中皂苷輔助藥物裝載方法是直接載yao方式中常用的一種載yao方式。上述方法也存在一些缺點:孵育法操作簡單,但載藥量低;凍融循環法、超聲法和擠出法對儀器的要求高,且可能會破壞外泌體的質膜結構造成藥物泄露,終造成載藥量不理想。外泌體具有對自身中流的靶向能力,作為載體傳遞藥物...
天然來源的外泌體含有眾多內源性脂質、蛋白及核酸類物質,其自身具有一定的成藥潛力,例如間充質干細胞來源的外泌體在組織修復領域獲得了巨大成功。當外泌體用作遞送載體時,一般還需人為裝載藥物。理想的載yao方法不僅要實現較高的載藥效率,還應保留外泌體和藥物的功能和完整性。目前,在不破壞外泌體膜完整性的情況下將藥物有效載入到外泌體中仍是一個巨大挑戰。現有的載yao方法可分為分泌前載藥法和分泌后載藥法。分泌前載藥法通常將親代細胞與藥物共孵育(一般需要加轉染試劑),使藥物進入細胞質,細胞質中的藥物通過主動或被動的方式被分選到外泌體中,然后通過合適的提取方法即可獲得載藥的外泌體。分泌后載yao方法是目前常用的...
甲狀腺ai(thyroidcarcinoma)是一種常見的內分泌惡性中流。在甲狀腺ai的所有亞型中,甲狀腺未分化ai(ATC)的惡性程度很高。目前ATC缺乏有效的zhiliao藥物,屬于難治性惡性中流疾病,傳統的放化療療效差,分子靶向藥物jin對部分基因突變型ATC有效。硬脂酞輔酶A去飽和酶1(stearoyl-CoAdesat urase1,SCD1)是一種脂肪酸合成和代謝的關鍵調節分子,也是催化飽和脂肪酸向單不飽和脂肪酸轉變的限速酶,參與細胞增殖、細胞凋亡等多種生理過程。為研究SCD1與ATC的關系,通過構建鑒定靶向SCD-1的小干擾RNA(siRNA)外泌體,分析以外泌體為載體的靶向SC...
β-欖香烯 (β-ELE) 是從莪術根莖中提取的一種新型的非細胞毒性抗中流藥物, 句有療效確切、低毒等特性, 能通過凋亡途徑抑制肝ai細胞、乳腺ai細胞等多種中流細胞的增殖與遷移, 并能逆轉中流細胞的多藥耐藥性, 增加對化療藥物的敏感性, 但其作用機制尚未完全闡明。目前研究認為第10染色體同源丟失性磷酸酶?張力蛋白基因 (PTEN) 能抑制多種ai癥的發生, 并能增加耐藥細胞對藥物的敏感性。Zhang等人研究顯示, 利用乳腺ai耐藥細胞株與負載β-ELE的外泌體 (50 μmol·L?1/L, 30 h) 共培養, 分析發現負載β-ELE的外泌體上調了耐藥細胞中miR-34a及其靶基因PTEN...
phil作為連翹的主要藥效成分之一,具有廣fan藥理作用,但極性較小、滲透性差、體內吸收較差、代謝較快,phil可促進肺中流組織中endostatin的表達,下調血管內皮生長因子(VEGF)表達,共同抑制中流xue管的生成。以磷脂和膽固醇為載體將phil制備成脂質體納米粒,增強了phil的抗氧化活性,緩釋性增強;采用聚山梨酯-80將揮發油和phil制成納米膠束,提高了phil的溶解度,增強了phil的透皮吸收。用外泌體作為藥物載體,制備一種負載連翹苷的外泌體遞藥系統(phil-exo)。制備的phil-exo被A549細胞攝取良好,對A549細胞遷移具有較高抑制作用,明顯提高phil的抗中流細...
外泌體載yao方法已在多種研究中得到應用,但各自有一定的局限性:共孵育依賴藥物跨膜運輸而包載;超聲法和電穿孔法較為常用,但都破壞了外泌體的膜結構而使藥物進入外泌體,與參數有較大關系;擠壓法依賴儀器的機械力,但機械力是否對外泌體產生影響未知;反復凍融法載藥能力較差;對外泌體修飾可以達到提高細胞攝取或者靶向而改善藥物的療效;藥物混合物中加入皂苷會有體內溶血的潛在風險。目前研究者應用較多的方法是共孵育結合超聲、超聲、電穿孔、修飾外泌體。過氧化氫酶載入外泌體后在炎癥大腦中的生物分布情況可以利用C57BL/6雌性小鼠來研究驗證。吉林整體項目外泌體載藥外泌體的提取方法在外泌體載藥系統中應用——微流控技術。...
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統中應用——免疫親和層析法。利用生物體內存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法,主要用于生物大分子的分離、純化。將其應用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結合,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,但是產量低。分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白,結果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix、CD9、CD63),同時,ELISA和PCR結果也證明了該方法的可行性。裝載紫杉醇的外泌體靶向給藥...
姜黃素是姜黃類植物中含有的一種多元酚, 它句有kang炎、抗氧化應激及抑制惡性中流細胞增殖等廣fan的藥理作用。在臨床應用中, 其水溶性較差, 有效成分利用率偏低。研究發現, 利用外泌體作為姜黃素的藥物載體, 姜黃素在體內的濃度、藥物穩定性隨之增加, 提高了藥物療效并且沒有明顯的不良反應。在體外研究中, 利用腸道Caco-2細胞模型模擬人體消化過程, 發現利用牛奶來源外泌體作為姜黃素載體, 可以明顯提高其溶解度, 增加腸道細胞攝取率, 進而降低因消化過程造成的有效成分的降解, 提高生物利用度。研究表明外泌體具有攜帶藥物透過BBB靶向膠質瘤并抑制中流生長的能力。甘肅外泌體載藥hplc乳腺ai是發...
去甲斑蝥素(NTCD)是中藥斑蝥所含活性成分斑蝥素的小分子去甲基化衍生物。研究表明,NTCD能在一定程度上提高ai細胞線粒體的呼吸控制率(PCR)及溶酶體酶的活性,干擾ai細胞分裂,抑制其DNA合成,對原發性肝ai、胃ai、食管ai、白血病、結腸ai及乳腺ai等有明顯的zhiliao作用。目前NTCD在臨床上主要有口服和靜脈滴注2種給藥途徑,但由于NTCD被機體吸收后廣fan分布于各組織qi官,不jin對泌尿qi官有較強的毒性,而且對胃、腸道也會產生嚴重的不良反應。外泌體是由細胞活化或受到一定刺激時分泌到細胞外的粒徑為40-100nm的囊泡。利用外泌體包載NTCD,能使NTCD即使處在惡劣的胞...
間充質干細胞外泌體(MSC-Exo)在外泌體載藥中作為藥物遞送的載體具有獨特優勢。目前臨床上普遍使用MSCs的原代細胞,雖然其可以產生大量的外泌體,但是對于大規模生產來說,它的增殖能力有限,產生的外泌體可能具有批次間的差異。Chen等人發現,使用c-myc轉染人胚胎干細胞衍生的間充質干細胞(hESC-MSC),能夠在不影響外泌體生產質量的前提下,提高MSCs的增殖率,縮短生產時間。轉染的hESC-MSC能夠供應毫克范圍內的外泌體,為生產具有生物學效益的外泌體提供了一定的可行性。此外,還可以對外泌體進行功能化修飾,進一步增強外泌體的作用優勢。外泌體的功能化修飾能夠延長外泌體的循環時間、增強外泌體...